1.一种检测古代丝织品的方法,其特征在于,以g、mg和mL计,包括以下步骤:
1)称取4-6g桑蚕丝置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸钠溶液中,水浴55-65min,水浴温度为75-85℃,取出用去离子水清洗三次以上,干燥;
2)取1.8-2.2g烘干的丝素,2.3-2.7g硝酸钙,加入甲酸48-52mL,搅拌80-100min,过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性,透析冷冻干燥后,将得到的丝素蛋白研磨成粉备用,得到丝素蛋白粉;
3)取2.8-3.2mL浓度为5-7mg/mL的氧化石墨烯浸泡在0.2-0.4M 丙二胺中回流2.8-
3.2h;然后加入5-6ml 0.1%(w / v)的六氯铂酸钠,连续搅拌并在相同温度回流20-40min后将5-7mL 1%w / 的v硼氢化钠逐滴加入到反应体系中 ,并在相同温度下进一步回流20-
40min,冷却最终的回流溶液并以5000-6000rpm离心9-11min后,用去离子水洗涤3-5次;
4)取1.8-2.2ml步骤3)所得溶液与5.8-6.2ml N,N-二甲基甲酰胺混合超声处理10-
20min;
5)电极1,2,3分别用0.02µm的Al2O3打磨后,用去离子水超声清洗,用28-32µL步骤4)所得溶液滴加到电极表面后,在空气中干燥;
6)将步骤5)处理后的电极1,2,3置于8-12 µL稀释至1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体中,在
1-5℃的环境中孵育5-7h后用PBS 7.4缓冲液冲洗,继而用1wt%的BSA溶液孵育28-32min,用PBS 7.4缓冲液冲洗;
7)取步骤2)所得蚕丝素蛋白粉,用CB 9.6缓冲液配制成90-110µg/mL的丝素蛋白溶液;
取0.02-0.2g文物样溶解于100ml CB 9.6缓冲液,混合搅拌均匀,静置,取上清液;
8)取步骤7)中丝素蛋白溶液8-12 µL滴加至步骤6)中处理后的电极1上,取步骤7)中文物样溶液8-12 µL滴加至步骤6)中处理后的电极2上,并在37℃潮湿的环境下孵育50-
70min,用PBS 7.4缓冲液冲洗;
9)取经步骤6)处理的金电极3和步骤8)处理的电极1,2,在5Mm [Fe(CN)6]3-/4-溶液中进行电化学检测,扫描电位为-0.2-0.6V,振幅为0.05V;将电极1,3所得电流峰值出现的差值作为对照,若电极2,3电流峰值出现差值,说明文物样含有桑蚕丝,反之则说明不含有桑蚕丝。
2.根据权利要求1所述一种检测古代丝织品的方法,其特征是:步骤2)中,过滤所得溶液用截留分子量为8000-10000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天,并每隔5-7h换一次水,将丝素蛋白溶液真空冷冻2-3天。
3.根据权利要求1所述一种检测古代丝织品的方法,其特征是:步骤3)中,回流温度为
65-75℃。
4.根据权利要求1所述一种检测古代丝织品的方法,其特征是:步骤6)和步骤8)中,PBS
7.4缓冲液的配制方法为:称取0.2 g 氯化钾,0.27 g磷酸二氢钾,8 g氯化钠和1.42 g磷酸氢二钠加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL,调节溶液的pH至7.4。
5.根据权利要求1所述一种检测古代丝织品的方法,其特征是:步骤7)中CB 9.6溶液的配制方法为:称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠 加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL,调节溶液的pH至9.6。
6.根据权利要求1所述一种检测古代丝织品的方法,其特征是:步骤9)中,电化学检测包含三个电极,金电极作为工作电极,铂电极作为辅助电极,饱和甘汞电极作为参比电极。