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专利号: 201811028767X
申请人: 浙江理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法,其特征在于,以µg、mg、g和µl、mL计,包括以下步骤:A)称取8-12mg硒化镉/硫化锌量子点,58-62mg聚甲基丙烯酸甲酯,38-42mg聚马来酸酐-十八烯共聚物,加入至0.8-1.2ml的氯仿中,与4.5-5.5ml浓度为1-2mg/ml的十二烷基苯磺酸钠水溶液混合,超声波均化处理,再将氯仿蒸发,将所得水溶性量子点珠离心纯化,用去离子水清洗2-4次;

B)称取步骤A)所得水溶性量子点珠0.2-0.22mg,加入1.8-2.2µg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,1.2-1.4µg的N-羟基琥珀酰亚胺,2.6-2.8ml的PBS 7.4缓冲液,反应1.5-2.5h;

C)将氧化石墨烯溶液与六氯合铂酸钠溶液混合,在冰水浴中反应,然后在剧烈搅拌下,加入硼氢化钠反应后,离心,用去离子水洗涤,烘干;

D)向浓度为0.08-0.12wt%的步骤C)中所得产物的水溶液中加入浓度为0.03-0.05wt%的氢氧化钠溶液,超声分散2-4h,加入盐酸调节pH为6.8-7.2,用去离子水离心洗涤,将所得产物用去离子水分散至浓度为0.08-0.12wt%,加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐至浓度为0.3-0.5wt%,滴入三乙烯四胺至浓度为0.4-0.6%,超声分散3-7min,室温下搅拌反应20-30h,透析烘干;

E)向步骤B)所得的混合溶液中加入8-12µl的2mg/ml的步骤D)所得的产物,反应1.5-

2.5h后,离心除去上清液,加入8-12µl稀释至1000倍的羊毛角蛋白抗体,在1-5℃环境下孵育过夜,加入8-12µl的1wt%牛血清蛋白孵育1-3h后,将溶液离心浓缩至5µl;

F)称取8-12g羊毛添加至180-200ml乙醇中,在35-45℃下搅拌1-3h后,用去离子水冲洗

3-5次烘干;

G)取4-6g烘干的羊毛以1:18-20 的浴比添加至CB 9.6缓冲液中,加入1-1.4g亚硫酸钠,在55-65℃下反应25-35min,用去离子水冲洗3-5次烘干;

H)取13-17wt%的硫酸铜溶液加入到13-17wt%的氢氧化钠溶液中,直至完全沉淀,使氢氧化钠稍过量,用去离子水清洗沉淀3-5次并抽滤3次,得到氢氧化铜沉淀;

I)取氢氧化铜沉淀13-17g,加入18-22ml去离子水,在16-18℃下缓慢加入无水乙二胺,同时用玻璃棒搅拌,直至沉淀完全溶解,得到铜乙二胺溶液;

J)将经步骤G)中处理后的羊毛放入45-55ml铜离子浓度为1.4-1.6mol/L的铜乙二胺溶液中,在50-60℃下溶解1-1.5h后冷却至室温过滤;

K)将步骤J)中过滤所得溶液装入透析袋透析,冷冻干燥,对干燥后的样品进行研磨,得到羊毛角蛋白;

L)取10µl浓度为2-3g/ml的壳聚糖溶液滴在抛光好的玻碳电极1和2上,晾干后滴加10µl 1.8-2.2µl的2%戊二酮溶液,室温孵育1-3h,在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的

100µg/ml羊毛角蛋白作为对照,在电极2上滴加20ul经处理后的文物样,在1-5℃冰箱里包被过夜,干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍,电极1,2上滴加28-32ul的1wt%牛血清蛋白,室温孵育1-3h,干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍;

M)取步骤E)所得的5µl浓缩液分别滴加至经步骤L)中处理的电极1,2上,在室温下孵育

0.5-1.5h,干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍,晾干;

N)将步骤M) 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描,得到电化学发光信号;若两电极均有发光信号,则判定文物样中有羊毛,若只有电极1有发光信号,则判定文物样中无羊毛。

2.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法,其特征在于,步骤A)中,离心速率为8000-12000rpm,离心时间为8-12min。

3.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法,其特征在于,步骤C)具体为:取4ml的0.2-0.3 mg/ml 氧化石墨烯溶液与180µl-220µl的1mM六氯合铂酸钠溶液混合,在冰水浴中反应,然后在剧烈搅拌下,加入0.8-1.2mg的硼氢化钠反应1h后,离心,使用去离子水洗涤2-4次,烘干。

4.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法,其特征在于,步骤E)中,羊毛角蛋白抗体用1wt%的牛血清蛋白进行稀释。

5.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法,其特征在于,步骤K)中,所得溶液用截留分子量为3500-4000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天,并每隔5-7h换一次水,然后真空冷冻干燥2-3天。

6.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法,其特征在于,步骤L)中,所述文物样的处理方法为:取0.02-0.2g文物样溶解于100mlCB 9.6缓冲液,混合搅拌均匀,静置,取上清液。