1.一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤:A、建立蛋白粉化学成分的电化学指纹图谱:
ⅰ、将同一品牌同一种蛋白粉不同批次的蛋白粉作为标准样品,在60-80℃条件下,干燥
1-6h,然后自然冷却;
ⅱ、准确称取0.2-1.2g干燥冷却后的蛋白粉并置于消解罐中,并向其中加入混合溶液,再向混合溶液中加入非离子表面活性剂和复合酶,然后将消解罐置于微波消解仪中进行消解,采用功率1200W,进行第一次升温,2min内升温至25-35℃,并在温度为35℃的条件下驻留2min;进行第二次升温,1min内由35-50℃,并在温度为50℃的条件下驻留30-40min;
ⅲ、将消解罐从微波消解仪中取出,并将消解罐中的混合液体转至带有磁力搅拌器的恒温水浴杯中,相继加入12mL浓度为0.080mol/L的硫酸锰溶液、8mL浓度为4mol/L的硫酸溶液和5mL浓度为1mol/L的丙酮溶液作为反应底液;
ⅳ、开启磁力搅拌器,调节转速为450-600r/min,在另一个恒温水浴杯中加入10mL浓度为0.40mol/L的溴酸钾溶液,在37℃的温度下恒温静置10min后,将溴酸钾溶液倒入反应底液;
ⅴ、用电化学工作站记录电压-时间曲线,以绘制出蛋白粉的电化学指纹图谱;
B、检测样品:
取待检测的蛋白粉样品,使用与标准样品相同的前处理条件,得出检测样品的图谱,将两者的指纹图谱用直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据;
C、重现性考察:
取待检测的蛋白粉样品,测定其图谱,测得的电化学指纹图谱的各种特征参数的RSD<
3%,表明所述方法具有很好的重现性;
进一步,所述电化学指纹图谱法包括如下步骤:A-1、标准样品选择:
同一产地同一品牌的蛋白粉,以4-8个批次为标准样品;
A-2、电化学指纹图谱法分析条件:
检测仪器:瑞士万通204N型电化学工作站,TRANSFORM800微波消解仪、HH-501型超级恒温水浴锅,85-2A型数显恒温磁力搅拌器,213型金属铂电极和217型甘汞电极;
A-3、电化学指纹图谱信息参数分析:
用Origin软件绘制电压-时间(E-t)曲线,即获得蛋白粉电化学指纹图谱以及其特征参数;
其中,图谱参数包括:
诱导时间(s):从加入试剂到振荡发生的时间;
振荡寿命(s):振荡开始到振荡结束的时间;
最大振幅(v):振荡过程中相邻电位正峰和负峰之间的最大差值;
振荡周期(s):振荡过程中出现相邻峰的时间;
最高电位(v);振荡曲线的电位最高值;
最低电位(v);振荡曲线的电位最低值;
平衡电位(v);体系达到热力学平衡时的电位;
测得的电化学指纹图谱的各种特征参数的RSD<3%;
B、检测样品:
取待检测的蛋白粉样品,使用与标准样品相同的条件检测,得出检测样品的指纹图谱,将两者的指纹图谱直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据,如果两者的图谱特征参数的RSD<10%,可认为是同一产品,若RSD>10%则认为是非同一产品;
C、重现性考察:
取6份待测蛋白粉样品,测定其图谱并进行考察。
2.根据权利要求1所述一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法,其特征在于:所述表面活性剂选用椰油基葡糖苷或鲸蜡硬脂基葡糖苷,且表面活性剂的加入量为混合溶液总质量的3-5%。
3.根据权利要求1所述一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法,其特征在于:所述复合酶的加入量为3000-8000U/g蛋白粉,且复合酶由木瓜蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、氨肽酶和二肽酶按照质量比2:2:1:1混合而成。
4.根据权利要求1所述一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法,其特征在于:所述混合溶液由0.1mol/L氯化铵与0.1mol/L氨水按2:1比例混合搅拌制成。