1.一种富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于它由以下步骤组成:
(1)乳酸菌的活化
将MRS固体培养基在121℃下灭菌20min,斜面放置冷却至35~45℃,在无菌操作台上分别接入甘油保存的植物乳杆菌、发酵乳杆菌菌液,在35~38℃培养12~24h;然后挑取生长良好的植物乳杆菌菌株、发酵乳杆菌菌株,分别接种到MRS液体培养基中,35~38℃恒温培养12~24h;
(2)乳酸菌的高密度培养
将步骤(1)活化后的植物乳杆菌菌株,以1%的接种量,接种在灭菌后的LP生长培养基中35~38℃培养12~24h,离心后收集菌体沉淀,用等体积无菌生理盐水悬浮,得浓度为4×
109~5×109cfu/mL的LP菌株菌悬液;
将步骤(1)活化后的发酵乳杆菌菌株,以1%的接种量,接种在灭菌后的LF生长培养基中35~38℃培养12~24h,离心后收集菌体沉淀,用等体积无菌生理盐水悬浮,得浓度为1×
109~2×109cfu/mL的LF菌株菌悬液;
上述的LP生长培养基含牛肉粉4~6g/L、酵母粉3~5g/L、柠檬酸三铵1~3g/L、葡萄糖
50~90g/L、蛋白胨8~12g/L、磷酸氢二钾3~5g/L、番茄汁100~200mL/L、硫酸锰0.05~
0.075g/L、氯化钡0.005~0.01g/L、乙酸钠5~7.5g/L,其余为蒸馏水;
上述的LF生长培养基含牛肉粉4~6g/L、酵母粉3~5g/L、柠檬酸三铵1~3g/L、葡萄糖
30~70g/L、蛋白胨8~12g/L、磷酸氢二钾3~5g/L、硫酸锰0.05~0.075g/L、氯化钡0.0075~0.0125g/L,其余为蒸馏水;
(3)麸皮乳酸发酵基质的配制
将山楂去籽后与水按质量比为1:0.8~1.2混合,蒸煮20~30min后打浆,得到山楂浆;
将红枣与水按质量比为1:1~2混合后蒸煮20~30min,去除枣核后打浆,得到红枣浆;将麸皮粉与水按质量比为1:0.8~1.2混合后,121℃蒸煮10min糊化淀粉,加入麸皮粉质量0.3%~0.5%的α-淀粉酶,α-淀粉酶活力≥50U/mg,搅拌均匀,在60~70℃下酶解1.5~2h,然后加入麸皮粉质量0.2%~0.4%的糖化酶,糖化酶活力≥50U/mg,45~55℃糖化2~4h;将糖化后的麸皮粉与红枣浆、山楂浆按质量比为1.5~2.5:1:1混合,在115℃下灭菌30min,得含水量50%~70%、还原糖含量8%~10%的麸皮乳酸发酵基质;
(4)接种发酵
将步骤(2)制得的LP菌株菌悬液、LF菌株菌悬液以体积比为1:1混合,制得菌浓度为2×
109~3×109cfu/mL的发酵剂,按7%~11%的接种量接入步骤(3)制得的麸皮乳酸发酵基质中,在35~40℃下发酵36~60h;
(5)冷冻干燥
将步骤(4)制得的发酵产物于-80~-60℃快速冻结后,在真空度为0.05~0.1MPa的冷冻干燥机干燥24~48h后粉碎,得到麸皮乳酸发酵粉;
(6)调配压片
将麸皮乳酸发酵粉与矫味剂、润滑剂混合均匀后过60~80目筛,并喷洒体积分数为
55%~65%的乙醇水溶液,用20~25目筛造粒,压制成片,即得到富含活菌的麸皮乳酸发酵片。
2.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:所述的MRS液体培养基含牛肉粉4~6g/L、酵母粉3~5g/L、柠檬酸三铵1~3g/L、葡萄糖18~25g/L、蛋白胨8~12g/L、磷酸氢二钾1~3g/L、硫酸锰0.04~0.06g/L、硫酸镁0.1~0.3g/L、乙酸钠
4~6g/L、吐温-80 0.5~1.5mL/L,其余为蒸馏水;MRS液体培养基中添加15~20g/L琼脂即为MRS固体培养基。
3.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:所述的LP生长培养基含牛肉粉5g/L、酵母粉4g/L、柠檬酸三铵2g/L、葡萄糖70g/L、蛋白胨10g/L、磷酸氢二钾4g/L、番茄汁150mL/L、硫酸锰0.0625g/L、氯化钡0.0075g/L、乙酸钠6.25g/L,其余为蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:所述的LF生长培养基含牛肉粉5g/L、酵母粉4g/L、柠檬酸三铵2g/L、葡萄糖50g/L、蛋白胨10g/L、磷酸氢二钾5g/L、硫酸锰0.0625g/L、氯化钡0.01g/L,其余为蒸馏水。
5.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,将山楂去籽后与水按质量比为1:1混合,蒸煮20min后打浆,得到山楂浆;将红枣与水按质量比为1:1.5混合后蒸煮20min,去除枣核后打浆,得到红枣浆;将麸皮粉与水按质量比为1:1混合后,121℃蒸煮10min糊化淀粉,加入麸皮粉质量0.4%的α-淀粉酶,α-淀粉酶活力≥50U/mg,搅拌均匀,在65℃下酶解2h,然后加入麸皮粉质量0.3%的糖化酶,糖化酶活力≥
50U/mg,50℃糖化3h;将糖化后的麸皮粉与红枣浆、山楂浆按质量比为2:1:1混合,在115℃下灭菌30min,得含水量60%、还原糖含量10%的麸皮乳酸发酵基质。
6.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:步骤(4)中,将步骤(2)制得的LP菌株菌悬液、LF菌株菌悬液以体积比为1:1混合,制得菌浓度为2×109~3×109cfu/mL的发酵剂,按9%的接种量接入步骤(3)制得的麸皮乳酸发酵基质中,在37℃下发酵48h。
7.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:步骤(5)中,将步骤(4)制得的发酵产物于-80℃快速冻结后,在真空度为0.05~0.1MPa的冷冻干燥机干燥24h后粉碎,得到麸皮乳酸发酵粉。
8.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:步骤(6)中,将麸皮乳酸发酵粉与矫味剂、润滑剂混合均匀后过80目筛,并喷洒体积分数为60%的乙醇水溶液,用20目筛造粒,压制成片。
9.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:所述的矫味剂是蔗糖、水苏糖、棉子糖、阿斯巴甜中任意一种或多种的混合物,其添加量为麸皮乳酸发酵粉质量的5%~10%。
10.根据权利要求1所述的富含活菌的麸皮乳酸发酵片的制备方法,其特征在于:所述的润滑剂是硬脂酸镁,其添加量为麸皮乳酸发酵粉质量的1%~1.5%。