1.一种采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于它由下述步骤组成:
(1)醋酸菌菌株的培养
将巴氏醋杆菌Acetobacter pasteurium活化培养后的菌株接种于驯化培养基中30±1℃驯化培养48小时,其中驯化培养基是向每100mL蒸馏水中加入2~6g葡萄糖、0.5~2g酵母膏、0.5~2g蛋白胨、0.3~0.4g Na2HPO4·2H2O、0.1~0.2g柠檬酸钠、1~2g琼脂制成,灭菌后加入1~3mL无水乙醇和0~3mL冰乙酸;再按上述方法重复驯化培养0~4次,并且驯化培养基中每100mL蒸馏水加入的冰乙酸逐次等量增加0~1mL;驯化培养完后分离出优势醋酸菌进行一级扩大培养和二级扩大培养,得到种子培养液;
(2)装置消毒
在密闭条件下,将微瀑布式梯形密闭培养装置用质量分数为95%的冰醋酸水溶液熏蒸
24小时,同时使用55W紫外灭菌灯辐照2小时,每立方米密闭空间里质量分数为95%的冰醋酸水溶液的使用量为100~200mL;
上述的微瀑布式梯形密闭培养装置是:培养槽(3)的顶部设置有注液口(b),培养槽(3)内自上而下依次设置有至少4个上表面开口的矩形槽(4),每个矩形槽(4)内设置有阶梯形导流板(5),相邻矩形槽(4)内的阶梯形导流板(5)交错设置,阶梯形导流板(5)的末端设置有导流孔(a),培养槽(3)的底部设置有出液口,出液口通过管道与加热槽(2)的入口相联通,加热槽(2)的出口通过管道经恒流泵(1)与培养槽(3)顶部的注液口相联通;
(3)醋酸菌循环培养
在无菌条件下,将快培液态培养基接种步骤(1)中的种子培养液,所得培养液从注液口(b)流入培养槽(3)中,从最上层的阶梯形导流板(5)逐层流入最下层的阶梯形导流板(5),再经培养槽(3)底部的出液口流入加热槽(2),加热后的培养液经蠕动泵(1)循环流入培养槽(3)中培养,培养液循环流速为500~800mL/min,培养温度为25~35℃;培养5~9天后,关闭恒流泵(1)、加热槽(2),回收培养槽(3)内的菌悬液,经离心后收集菌体,即得醋酸菌;
上述的快培液态培养基是向每100mL蒸馏水中加入6~8g葡萄糖、1~3mL无水乙醇、3~
5g酵母提取物、1~3g牛肉膏、0.2~0.3g柠檬酸钠与柠檬酸质量比为1:1的混合物、5~7.5g氯化钠、2.5~5g乙酸钠、0.75~1.25g吐温-20,pH值为6~7。
2.根据权利要求1所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:所述的矩形槽(4)的长为80~120cm、宽为10~20cm、高为6~12cm。
3.根据权利要求1所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:所述阶梯形导流板(5)的阶梯数为10~30,且相邻阶梯之间的高度差为1~12mm。
4.根据权利要求3所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:所述阶梯形导流板(5)的阶梯数为15~25,且相邻阶梯之间的高度差为3~6mm。
5.根据权利要求1所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:所述导流孔(a)的直径为1~3cm。
6.根据权利要求1所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:步骤(3)中,所述种子培养液的接种量为10%~14%。
7.根据权利要求1所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:步骤(3)中,所述快培液态培养基是向每100mL蒸馏水中加入7g葡萄糖、2mL无水乙醇、4g酵母提取物、2g牛肉膏、0.25g柠檬酸钠与柠檬酸质量比为1:1的混合物、6.25g氯化钠、3.75g乙酸钠、1g吐温-20,pH值为6.8。
8.根据权利要求1所述的采用微瀑布式梯形密闭培养装置快速培养醋酸菌的方法,其特征在于:步骤(3)中,培养液循环流速为530~550mL/min,培养温度为30℃。