1.一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）碳量子点的制备：将水和十二烷基苯磺酸钠加入到正庚烷中，制得油相溶液；加入生物质焦油水溶液、正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，振荡得到反相微乳液；加入十二胺，超声，马弗炉中保温，冷却，破乳，离心，制得碳量子点溶液；然后取一半经透析纯化、冷冻干燥，得到碳量子点；

2）碳量子点标记羊毛角蛋白二抗的制备：将碳量子点、碳化二亚胺和二抗加入到9-

11mmol/L的磷酸缓冲盐溶液中，在室温条件下搅拌2-3 h后，用磷酸缓冲盐溶液对溶液进行多次洗涤离心，得到碳量子点标记羊毛角蛋白二抗；

3）用酒石酸将0.03-0.06 mol/L的酒石酸钠溶液的pH调为2.5-2.8，将此溶液与350-

450μl步骤1）所剩余的碳量子点溶液混合均匀，制得碳量子点染胶溶液；

4）分别称取等质量已被混淆的由山羊毛、绵羊毛和岩羊毛制作的古代毛织品残片作为样品，用去离子水清洗，烘干；分别浸在pH =1.5-2.5的HBr溶液中1-2h，用去离子水搓洗，烘干，分别标记为A，B，C三组；将A，B，C三组以1：15-25的浴比加入含有0.05-0.15mol/L的LiBr和0.02-0.04mol/L的十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节pH值到8-11，超声，放入微波反应器辐射水解6-8min；

5）从反应器中取出，将三个样品分别倒入三口烧瓶，将三口烧瓶放在恒温水浴锅中，调节水浴温度70-90℃，通氮气10-20分钟，缓缓加入10-25ml的2.5-3.5 mol/L 三(2-羧乙基)膦溶液，通氮气搅拌，使羊毛溶解，真空抽滤，去除未溶羊毛及杂质；

6）分别加入20-35g硫酸铵，搅拌均匀，调节滤液pH，离心8-15min，将下层溶液在2-6℃条件下用透析袋透析50-60h；低温真空浓缩至原体积的1/4-1/2，得到羊毛角蛋白提取液A、B、C；

7) SDS-PAGE凝胶电泳：取羊毛角蛋白提取液A、B、C于2*样品缓冲液按1∶0.8-1.2比例混合，水浴加热于93-97℃下加热1.5-2.5 min，使蛋白质变性；样品冷却至室温后，分别取羊毛角蛋白提取液A、B、C 10-20μl加入凝胶点样孔，进行SDS-PAGE凝胶电泳；浸入步骤3）所得碳量子点染胶溶液，以低速在摇床上振荡2.5-3.5h，观察样品的电泳图像；本实验中一次制作两张样品胶，记为胶1、胶2；

8）电转移：将电泳后的胶平铺在经甲醇和电转缓冲液处理过的聚偏氟乙烯膜上，夹在滤纸和海绵中间组装成转运夹层，放入湿式转膜装置中，恒流转膜；可得到两张电转移膜，记为膜1、膜2；

9）膜成像：电转移完成后，取出聚偏氟乙烯膜，放入凝胶成像系统中成像，观察蛋白条带转移情况；

10）封闭：取出聚偏氟乙烯膜，用10-20mL的三乙醇胺缓冲盐水溶液洗膜4-6min，用封闭液在室温条件下处理50-70min；

11）免疫处理：用抗体稀释液以950-1050:1的体积比稀释山羊毛一抗，将膜1浸没在一抗稀释液中，室温条件下摇床孵育1 2 h；取出膜1后用TBST液洗膜，之后浸入8-12mL稀释的~碳量子点标记羊毛二抗中室温条件下孵育1-2 h；膜2用绵羊毛抗体进行同样处理；

12）发光显色：直接将免疫处理后的膜1、膜2在凝胶成像系统中成像，利用碳量子点在紫外光照射下发射荧光的性能，得到免疫印迹图像；膜1中得到荧光条带为山羊毛纺织品残片，膜2中得到荧光条带的为绵羊毛纺织品残片，则另一样品即为岩羊毛纺织品残片。

2.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤1）中，碳量子点的制备方法具体如下：向15-25 m L有机溶剂正庚烷中，加入摩尔质量比为18-22:1的水和十二烷基苯磺酸钠，制得油相溶液；向油相溶液中，加入质量分数为45-55%的生物质焦油水溶液，再加入摩尔质量比为1.8-2.2:1的正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，用力摇晃，得到反相微乳液，静置10-13h；向反相微乳液中，加入0.2-0.4 g十二胺，室温下超声8-12 min，倒入含聚四氟乙烯内胆的反应釜内，在110-130℃马弗炉中放置

2-4 h，取出，自然冷却至室温；用无水甲醇破乳，洗涤数次，离心，制得碳量子点溶液；将一半溶液用截留分子量为1000的透析袋透析20-28 h，冷冻干燥，可得到碳量子点。

3.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤4）中，超声的具体操作为：室温下以190-210W的功率超声30-50min。

4.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤5）中，所述通氮气搅拌具体为向三口烧瓶中持续通入氮气，利用机械搅拌以

180-220r/min的速度搅拌1.8-2.2 h至羊毛溶解，溶液变澄清。

5.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤6）中，所述调节滤液pH具体为用4-5mol/ L的硫酸溶液调节步骤9）得到的滤液pH值至羊毛角蛋白等电点4.1-4. 3；所述透析袋的截留分子量为3500-4000。

6.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤7）中，所述样品缓冲液为1.8-2.2ml 0.4-0.6mol/L三（羟甲基）氨基甲烷-HCl， 1.8-2.2ml甘油，1.8-2.2ml 18-22%十二烷基硫酸钠， 0.4-0.6mol 0.08-0.12%溴酚蓝，0.8-1.2mlβ-巯基乙醇的混合溶液；三（羟甲基）氨基甲烷-HCl的pH为6.7-6.9。

7.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤7）中，凝胶电泳具体操作为：将电压调至28-32V电泳18-22min；当样品完全进入分离胶后，再将电压调成80-100V；当样品的溴酚蓝迁移至玻璃胶板底部约0.8-1.2cm时，即可停止电泳。

8.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤8）中，电转移操作中，使用的聚偏氟乙烯膜先用甲醇浸泡50-70s，再用电转缓冲液浸泡；所用的滤纸、海绵需要用电转缓冲液浸润，按照海绵—滤纸—电泳凝胶—聚偏氟乙烯膜—滤纸—海绵的顺序组装转运夹层，恒流转膜是在100mA恒流下转膜1 2 h；本操~作采用湿法转膜，转移过程中放热，需将转膜装置放在冰浴中。

9.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤10）中，孵育一抗和二抗后，室温下在摇床上用TBST液洗膜三次，每次4-

6min；所述封闭液为5wt%脱脂奶粉。

10.如权利要求1所述的一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，其特征在于，步骤11）中，所述抗体稀释液为TBST液。