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专利号: 2018110462382
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一组检测南洋楹溃疡病菌的巢式PCR引物组,其特征在于,由第一轮扩增引物对EF‑

688F、EF‑986R和第二轮特异性扩增引物对EF‑AF、EF‑AR组成;所述EF‑688F、EF‑986R、EF‑AF、EF‑AR的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:4所示。

2.权利要求1所述巢式PCR引物组在制备检测南洋楹溃疡病菌的试剂或试剂盒中的应用。

3.一种检测南洋楹溃疡病菌的巢式PCR试剂盒,其特征在于,包含权利要求1所述检测南洋楹溃疡病菌的巢式PCR引物组。

4.根据权利要求3所述巢式PCR试剂盒,其特征在于,所述第一轮扩增引物对和第二轮特异性扩增引物对的终浓度比为1:1。

5.根据权利要求3所述巢式PCR试剂盒,其特征在于,所述巢式PCR试剂盒还包含第一轮PCR反应体系;所述第一轮PCR反应体系包括DNA模板2 μL,10×PCR Buffer 5 μL,dNTPs混合液4 μL,5 U/μL rTaq聚合酶0.25 μL,10 μmoL/L第一轮扩增引物对1 μL,余量灭菌超纯水补足至50 μL。

6.根据权利要求5所述巢式PCR试剂盒,其特征在于,所述第一轮PCR反应的条件为94℃预变性5 min,94℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸2 min,共25个循环,72℃延伸10 min;4℃保存。

7.根据权利要求5所述巢式PCR试剂盒,其特征在于,所述巢式PCR试剂盒还包含第二轮PCR反应体系;所述第二轮PCR反应体系包括第一轮PCR反应所得产物2 μL,10×PCR Buffer 

5 μL,dNTPs混合液4 μL,5 U/μL rTaq聚合酶0.25 μL,10 μmoL/L第二轮特异性扩增引物对

1 μL,余量灭菌超纯水补足至50 μL。

8.根据权利要求7所述巢式PCR试剂盒,其特征在于,所述第二轮PCR反应的条件为94℃预变性5 min,94℃变性30 s,63℃退火30 s,72℃延伸18 s,共37个循环,72℃延伸7 min。

9.一种南洋楹溃疡病菌的巢式PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.提取待测组织样本DNA;

S2.采用权利要求3~8任一所述巢式PCR试剂盒进行巢式PCR反应;

S3.将反应产物进行电泳,若电泳结果存在270 bp的单一目的条带,则判断待测组织样本中含有南洋楹溃疡病菌。

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