1.一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法,其特征在于,以µg、mg、g和µl、mL计,包括以下步骤:A)称取18-22mg硒化镉/硫化锌量子点,118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯,78-82mg聚马来酸酐-十八烯共聚物,加入至1.8-2.2ml的氯仿中,与4.5-5.5ml浓度为的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合,用超声均化,再将氯仿蒸发,将所得水溶性量子点珠离心纯化,用去离子水清洗2-4次;
B)称取步骤A)所得水溶性量子点珠0.1-0.14mg,加入18-22µl的1-(3-二甲氨基丙基)-
3-乙基碳二亚胺盐酸盐,N-羟基琥珀酰亚胺,反应1.5-2.5h;
C)将氧化石墨烯溶液与六氯合铂酸钾溶液混合,在冰水浴中反应,然后在剧烈搅拌下,加入硼氢化钠反应后,离心,用去离子水洗涤,烘干,得到含铂氧化石墨烯;
D)取0.3-0.5mg步骤C)所得的含铂氧化石墨烯,加入0.3-0.5ml二甲基甲酰胺,超声处理1-3h,然后加入0.04-0.06g丙二胺以及0.008-0.012g二环己基碳二亚胺,超声15-25min,在55-65℃反应4-8h,加入0.15-0.25ml乙醇静置过夜,用去离子水清洗2-4次,烘干;
E)往步骤B)所得的溶液中加入8-12µl 2mg/ml的步骤D)处理后的产物,反应1.5-2.5h后,离心除去上清液,加入8-12µl稀释至1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体,在1-5℃环境下孵育过夜,加入8-12µl的1wt%牛血清蛋白孵育1-3h后,将溶液离心浓缩至5µl;
F)称取4-6g桑蚕丝置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸钠溶液中,水浴55-65min,水浴温度为75-85℃,取出用去离子水清洗三次以上,干燥,得到丝素;
G)取1.8-2.2g烘干的丝素,2.3-2.7g硝酸钙,加入甲酸48-52mL,搅拌80-100min,过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性,透析冷冻干燥后,将得到的丝素蛋白研磨成粉备用;
H)取10µl浓度为2-3g/ml的壳聚糖溶液滴在抛光好的玻碳电极1和2上,晾干后滴加10µl 1.8-2.2µl的2%戊二酮,室温孵育1-3h,在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照,在电极2上滴加20ul经处理后的文物样,在1-5℃冰箱里包被过夜,干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍,电极1,2上滴加28-32ul的1wt%牛血清蛋白,室温孵育1-3h,干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍;
I)将步骤E)所得的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1,2上,在室温下孵育
0.5-1.5h,干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍,晾干;
J)将步骤I) 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描,得到电化学发光信号;若两电极均有发光信号,则判定文物样中有桑蚕丝,若只有电极1有发光信号,则判定文物样中无桑蚕丝。
2.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤A)中,离心速率为8000-12000rpm,离心时间为8-12min。
3.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤C)具体为:取4ml的0.2-0.3 mg/ml 氧化石墨烯溶液与180µl-220µl的1mM六氯合铂酸钾溶液混合,在冰水浴中反应,然后在剧烈搅拌下,加入0.8-1.2mg的硼氢化钠反应1h后,离心,使用去离子水洗涤沉淀2-4次,烘干。
4.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤E)中,桑蚕丝素蛋白抗体用1wt%牛血清蛋白进行稀释。
5.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤G)中,所得溶液用截留分子量为8000-10000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天,并每隔5-7h换一次水,将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥2-3天。
6.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤H)中,文物样的处理方法为:取0.02-0.2g文物样溶解于100mlCB 9.6缓冲液,混合搅拌均匀,静置,取上清液。