1.一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,包括以下步骤:
A)称取4-6g桑蚕丝置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸钠溶液中,水浴55-65min,水浴温度为75-85℃,取出用去离子水清洗三次以上,干燥,得到丝素;
B)取1.8-2.2g烘干的丝素,2.3-2.7g硝酸钙,加入甲酸48-52mL,搅拌80-100min,过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性,透析冷冻干燥后,将得到的丝素蛋白研磨成丝素蛋白粉,备用;
C)称取18-22mg硒化镉/硫化锌量子点,118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯,78-82mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物,加入至1.8-2.2ml的氯仿中,与4.5-5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合,超声波均化处理,再将氯仿蒸发;然后将所得水溶性量子点珠离心纯化,用去离子水清洗2-4次得到量子点珠;
D)取0.9-1.1µg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺,0.1-0.14mg的步骤C)所得水溶性量子点珠加入到2.5-3.1ml的PBS 7.4缓冲液中,边缓慢搅拌边逐滴加入90-110µl 用
1wt%牛血清蛋白稀释至1000倍的丝素蛋白抗体,在室温下放置35-45min,离心,取沉淀物用
600µl PBS 7.4缓冲液重悬,然后在1-5℃下备用;
E)取0.02-0.2g文物样溶解于100ml的CB 9.6缓冲液,混合搅拌均匀,静置,取80-120µl上清液加入到酶标板a列,将步骤B)所得丝素蛋白粉用CB 9.6缓冲液配制成100µg/ml的丝素蛋白溶液,取80-120µl加入到酶标板b、c列,b列作为阳性对照,c列作为空白对照,取80-
120µl PBS 7.4缓冲液加入到酶标板d列作为阴性对照,将酶标板置于微波炉中低档孵育2-
4min,吸出孔内液体,用PBS 7.4缓冲液洗涤;
F)每孔中加入封闭液180-220µl,置于微波炉中孵育2-4min,吸出孔内液体,用PBS 7.4缓冲液洗涤;
G)取步骤D)所得溶液80-120µl加入到酶标板a,b,d列中,取封闭液80-120µl加入到c列中,置于微波炉中孵育2-4min,吸出孔内液体,用PBS 7.4缓冲液洗涤;
H)使用荧光酶标仪测定荧光值,将阴性对照的OD均值+3个SD作为cut-off值,若a列的荧光平均值>d列的cut-off值,则判定文物样中含有桑蚕丝。
2.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤B)中,所得溶液用截留分子量为8000-10000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天,并每隔5-
7h换一次水,将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥2-3天。
3.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤C)中,离心速率为8000-12000rpm,离心时间为8-12min。
4.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤E)中,CB 9.6缓冲液配制方法为:称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL,调节溶液的pH至9.6。
5.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤D)和步骤E)中,PBS 7.4缓冲液的配制方法为:称取0.2 g 氯化钾,0.27 g磷酸二氢钾,8 g氯化钠和1.42 g磷酸氢二钠加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至
1000 mL,调节溶液的pH至7.4。
6.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤F)中,所述封闭液为1wt%牛血清蛋白。
7.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤E)步骤F)步骤G)中,用PBS 7.4缓冲液洗涤3-5次,每次2-4min。
8.如权利要求1所述的一种基于微波检测古代丝织品的方法,其特征在于,步骤H)中,荧光酶标仪检测荧光时,激发波长为360nm,发射波长为500nm。