1.一种用于测定南极磷虾中17种类固醇激素的方法,其特征是,该方法包括:(1)对南极磷虾进行预处理:将南极磷虾进行冷冻干燥处理,然后研磨粉碎,再采用甲醇、乙酸乙酯和乙腈作为提取溶剂进行提取,提取后,采用酶和碱进行水解,水解后,采用HLB固相萃取柱-NH2柱和QuEChERS萃取柱对水解液进行净化,得到待检测液;
(2)采用超高液相色谱-质谱方法对待检测液进行检测。
2.如权利要求1所述的方法,其特征是:所述17种类固醇激素为雌三醇、可的松、丙酸睾酮、醋酸甲地孕酮、己酸孕酮、醋酸可的松、地塞米松、诺龙、泼尼松龙、醛固酮、睾酮、雌二醇、孕酮、氢化可的松、己烯雌酚和炔诺酮。
3.如权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(1)中,南极磷虾进行冷冻干燥处理的温度为-10℃至-50℃;
将冷冻干燥的南极磷虾用高速组织粉碎机研磨粉碎。
4.如权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(1)中,提取溶剂提取的具体方法为:首先将粉碎后南极磷虾采用甲醇进行提取,提取后获得甲醇上清液和甲醇沉淀物;然后将甲醇沉淀物采用乙酸乙酯进行提取,提取后获得乙酸乙酯上清液和乙酸乙酯沉淀物;
再将乙酸乙酯沉淀物采用乙腈进行提取,提取后获得乙腈上清液和乙腈沉淀物,最后合并甲醇上清液、乙酸乙酯上清液和乙腈上清液获得提取液。
5.如权利要求4所述的方法,其特征是:
采用甲醇涡旋提取,重复提取一~三次,每次涡旋提取1-3min;
采用乙酸乙酯涡旋提取,重复提取一~三次,每次涡旋提取1-3min;
采用乙腈涡旋提取,重复提取一~三次,每次涡旋提取1-3min。
6.如权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(1)中,提取后,首先采用酶解方式进行水解,获得酶解液,然后将酶解液再采用NaOH缓冲液进行水解,获得水解液。
7.如权利要求6所述的方法,其特征是:采用β-葡糖苷酸酶进行酶解,酶解条件:35~40℃酶解10~14h;
氢氧化钠缓冲液为pH=11.5~12.5的氢氧化钠溶液。
8.如权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(1)中,水解液先采用HLB固相萃取柱-NH2柱进行净化,再采用QuEChERS萃取柱进行净化。
9.如权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(2)中,超高效液相色谱的条件如下:流动相条件为:A相为0.1~0.2v/v%的甲酸水溶液,B相为甲醇,进一步的,A相为0.1v/v%的甲酸水溶液;流速为0.2~0.3mL/min,进一步的,流速为0.2mL/min;梯度洗脱程序如下:0~
8min,流动相A 20%→30%,流动相B80%→70%;8~10min,流动相A 30%→35%,流动相B70%→65%;
进一步的,色谱柱:C18柱,2.1mm×150mm,粒径5μm;柱温:30~35℃,更进一步的,柱温为
30℃,样品温度10~15℃,更进一步的,样品温度为10℃,进样体积10μL。
10.如权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(2)中,质谱条件如下:电喷雾离子源,多反应离子检测模式(MRM),电离电压3.5kV(ESI+),电离电压3.0kV(ESI-),毛细管温度350℃,蒸汽温度300℃,脱溶剂气(N2),脱溶剂气流量800L/h。