1.一种南极磷虾中泼尼松龙、醛固酮、睾酮和雌二醇的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将新鲜南极磷虾在-10℃至-50℃条件下冷冻干燥后粉碎;
(2)向步骤(1)粉碎后的南极磷虾中加入乙酸-乙酸钠缓冲液和β-葡萄糖苷酸酶进行酶解;
(3)向上述酶解液中加入乙腈或乙酸乙酯涡旋提取,取上清液;
(4)将步骤(3)所得的上清液用QuEChERS固相萃取柱萃取处理,涡旋净化,离心,取上清液;
(5)旋转蒸发至干,用乙腈或乙酸乙酯复溶,过0.2μm滤膜,得到南极磷虾中泼尼松龙、醛固酮、睾酮和雌二醇的提取物。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,冷冻干燥的温度是-40℃,采用高速组织粉碎机研磨粉碎。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,南极磷虾与乙酸-乙酸钠缓冲液、β-葡萄糖苷酸酶的加入量比(g/mL/μL)为1~3:1.2~1.5:5~6;所述乙酸-乙酸钠缓冲液的浓度为
2.0mol·L-1,PH为5~6,优选为PH=5.2。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,酶解的温度为30-40℃,酶解的时间为10-14h;优选酶解温度为37℃,酶解时间为12h。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,每次涡旋提取时间为1-3min,乙腈或乙酸乙酯的体积为10~30mL,优选涡旋时间为2min。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中,涡旋时间为1-4min,离心为
4000~4500r/min离心5~8min;优选地,涡旋时间为2min,4000r/min离心5min。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(5)中,旋转蒸发的温度为30-60℃,优选旋转蒸发的温度为50℃;优选地,乙腈或乙酸乙酯复溶体积为1~3mL。
8.权利要求1~7任一所述的制备方法得到含有泼尼松龙和醛固酮、睾酮和雌二醇的产品。
9.权利要求8所述的产品中泼尼松龙和醛固酮、睾酮和雌二醇的检测方法,其特征在于,采用超高效液相色谱-质谱法。
10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于,液相条件为:色谱柱:Acchrom Unitary C18柱,2.1mm×150mm,粒径5μm,柱温:30~35℃,进一步的,柱温为30℃,样品温度
10~15℃,进一步的,样品温度为10℃,进样体积10μL;流动相条件为:A相为0.1~0.2v/v%的甲酸水溶液,B相为甲醇,进一步的,A相为0.1v/v%的甲酸水溶液;流速为0.2~0.3mL/min,进一步的,流速为0.2mL/min;梯度洗脱程序如下:0~8min,流动相A20%→30%,流动相B80%→70%;8~10min,流动相A 30%→35%,流动相B70%→65%;色谱条件为:电喷雾离子源,多反应离子检测模式(MRM),电离电压3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂气温度350℃,脱溶剂气(N2),脱溶剂气流量800L/h。