1.一种南极磷虾中泼尼松龙的检测方法，其特征在于，包括如下步骤，提取：

（1）将新鲜南极磷虾在‑40℃条件下冷冻干燥后粉碎；

（2）向步骤（1）粉碎后的南极磷虾中加入乙酸‑乙酸钠缓冲液和β‑葡萄糖苷酸酶进行酶解；

（3）向上述酶解液中加入乙腈涡旋提取，取上清液；

（4）将步骤（3）所得的上清液用QuEChERS固相萃取柱萃取处理，涡旋净化，离心，取上清液；

（5）旋转蒸发至干，用乙腈复溶，过0.2μm滤膜，得到南极磷虾中泼尼松龙的提取物；

检测：

采用超高效液相色谱‑质谱法进行检测，液相色谱条件为：色谱柱：Acchrom Unitary C18柱，2.1mm×150mm，粒径5μm，柱温：30~35℃，样品温度10~15℃，进样体积10μL；流动相条件为：A相为0.1 0.2 % v/v的甲酸水溶液，B相为甲醇；流速为0.2 0.3mL/min；梯度洗脱程~ ~

序如下：0 8min，流动相A 20%→30%，流动相B 80%→70%；8 10min，流动相A 30%→35%，流动~ ~

相B 70%→65%；质谱条件为：电喷雾离子源，多反应离子检测模式（MRM），电离电压3.0kV，离子源温度150℃，脱溶剂气温度350℃，脱溶剂气N2，脱溶剂气流量800L/h。

2.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃。

3.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述样品温度为10℃。

4.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述A相为0.1 % v/v的甲酸水溶液。

5.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述流速为0.2mL/min。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，采用高速组织粉碎机研磨粉碎。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，南极磷虾与乙酸‑乙酸钠缓冲液、β‑葡萄糖苷酸酶的加入量比为1 3g：1.2 1.5mL：5 6μL；所述乙酸‑乙酸钠缓冲液的浓度为‑1 ~ ~ ~

2.0mol•L ，pH为5.2 6。

~

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述pH=5.2。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，酶解的温度为30‑40℃，酶解的时间为10‑14h。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶解温度为37℃，酶解时间为12h。

11.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，涡旋提取时间为1‑3min，乙腈的体积为10 30mL。

~

12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述涡旋时间为2min。

13.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中，涡旋时间为2‑3min，离心为4000 4500r/min离心5 8min。

~ ~

14.根据权利要求13所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中，涡旋时间为2min，

4000r/min离心5min。

15.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，旋转蒸发的温度为50‑60℃。

16.根据权利要求15所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，所述旋转蒸发的温度为

50℃。

17.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，乙腈复溶体积为1 3mL。

~

18.一种南极磷虾中醛固酮、睾酮和雌二醇的检测方法，其特征在于，包括如下步骤，提取：

（1）将新鲜南极磷虾在‑40℃条件下冷冻干燥后粉碎；

（2）向步骤（1）粉碎后的南极磷虾中加入乙酸‑乙酸钠缓冲液和β‑葡萄糖苷酸酶进行酶解；

（3）向上述酶解液中加入乙酸乙酯涡旋提取，取上清液；

（4）将步骤（3）所得的上清液用QuEChERS固相萃取柱萃取处理，涡旋净化，离心，取上清液；

（5）旋转蒸发至干，用乙酸乙酯复溶，过0.2μm滤膜，得到南极磷虾中醛固酮、睾酮和雌二醇的提取物；

检测：

采用超高效液相色谱‑质谱法进行检测，液相色谱条件为：色谱柱：Acchrom Unitary C18柱，2.1mm×150mm，粒径5μm，柱温：30~35℃，样品温度10~15℃，进样体积10μL；流动相条件为：A相为0.1 0.2 % v/v的甲酸水溶液，B相为甲醇；流速为0.2 0.3mL/min；梯度洗脱程~ ~

序如下：0 8min，流动相A 20%→30%，流动相B 80%→70%；8 10min，流动相A 30%→35%，流动~ ~

相B 70%→65%；质谱条件为：电喷雾离子源，多反应离子检测模式（MRM），电离电压3.0kV，离子源温度150℃，脱溶剂气温度350℃，脱溶剂气N2，脱溶剂气流量800L/h。

19.如权利要求18所述检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃。

20.如权利要求18所述检测方法，其特征在于，所述样品温度为10℃。

21.如权利要求18所述检测方法，其特征在于，所述A相为0.1 % v/v的甲酸水溶液。

22.如权利要求18所述检测方法，其特征在于，所述流速为0.2mL/min。

23.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，采用高速组织粉碎机研磨粉碎。

24.根据权利要求18所述的检测方法，其特征在于，南极磷虾与乙酸‑乙酸钠缓冲液、β‑葡萄糖苷酸酶的加入量比为1 3 g：1.2 1.5 mL：5 6μL；所述乙酸‑乙酸钠缓冲液的浓度为‑1 ~ ~ ~

2.0mol•L ，pH为5.2 6。

~

25.根据权利要求24所述的检测方法，其特征在于，所述pH=5.2。

26.根据权利要求18所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，酶解的温度为30‑40℃，酶解的时间为10‑14h。

27.根据权利要求26所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶解温度为37℃，酶解时间为12h。

28.根据权利要求18所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，涡旋提取时间为1‑

3min，乙酸乙酯的体积为10 30mL。

~

29.根据权利要求28所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述涡旋时间为2min。

30.根据权利要求18所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中，涡旋时间为2‑3min，离心为4000 4500r/min离心5 8min。

~ ~

31.根据权利要求30所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中，涡旋时间为2min，

4000r/min离心5min。

32.根据权利要求18所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，旋转蒸发的温度为50‑

60℃。

33.根据权利要求32所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，所述旋转蒸发的温度为

50℃。

34.根据权利要求18所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，乙酸乙酯复溶体积为1~

3mL。