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专利号: 2018110750394
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组菌,其特征在于,所述重组菌,以大肠杆菌为宿主、采用pET系列载体表达了氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示、编码核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的氨基酸脱氨酶突变体。

2.一种高密度发酵生产L-氨基酸脱氨酶的方法,其特征在于,所述方法是使用权利要求1所述的重组菌进行发酵生产。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述方法是将所述重组菌,按照5~8%接种量接种于发酵培养基,发酵罐装液量为3.0L/5.0L,通气量1.5~2.5vvm,温度36~38℃,搅拌速率500~600rpm,设定溶氧为100%,当OD600达到15~18时,溶氧上升至60%以上,添加补料培养基,通过溶氧与补料相关联,控制溶氧在20~40%;当培养至OD600在20~25,将温度下降至24~25℃,加入10~15g/L乳糖诱导氨基酸脱氨酶的表达,发酵培养24~28h,OD600达到75~90时结束发酵,发酵过程中通过补加氨水控制pH在6.5~7.5。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述发酵培养基的成分包括:甘油6g/L,酵母粉15~20g/L,大豆蛋白胨5~10g/L,K2HPO4·12H2O 2.0~3.0g/L,KH2PO45.0~8.0g/L,金属离子液10mL/L;所述补料培养基的成分为:甘油400~600g/L,酵母粉5~8g/L,MgSO4·

7H2O6~10g/L。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述金属离子液的成分包括:FeSO4·

7H2O5g/L,CaCl2 2g/L,ZnSO4·7H2O 1.2g/L,MnSO4·4H2O 0.4g/L,(NH4)6MoO24·4H2O 0.1g/L,H3BO30.5g/L。

6.一种重组菌转化生产苯丙酮酸的方法,其特征在于,所述方法是以苯丙氨酸为底物,应用权利要求1所述的重组菌转化底物生产苯丙酮酸。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述应用权利要求1所述的重组菌转化底物生产苯丙酮酸的转化条件是:pH 7.5~8.0,转化温度为22~26℃,转化时间18~24h,湿细胞添加量25.0~30.0g/L。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述应用权利要求1所述的重组菌转化底物生产苯丙酮酸在发酵罐中进行,搅拌转速为400rpm,通气量0~12h控制为0.5vvm,12h以后关闭通气至转化结束。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,在所述应用权利要求1所述的重组菌转化底物生产苯丙酮酸的转化体系添加0.1~0.2mmoL/L MgCl2。

10.权利要求1所述的重组菌在制备苯丙酮酸中的应用。