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专利号: 201811077606X
申请人: 东北林业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种人参稀有皂苷Rg3的生物转化方法,其特征在于,包括:(1)将人参进行提取得到人参总皂苷提取液;

(2)向人参总皂苷提取液中加入由a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3和β‑葡萄糖苷酶Bgp1组成的酶混合物进行生物转化,得到含有人参稀有皂苷Rg3的转化产物;优化后的a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3的基因序列为SEQ ID No.5所示,优化后的β‑葡萄糖苷酶Bgp1的基因序列为SEQ ID No.8所示。

2.一种人参稀有皂苷Rg3的生物转化方法,其特征在于,包括:(1)将人参进行提取得到人参总皂苷提取液;

(2)向人参总皂苷提取液中加入由a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3、β‑葡萄糖苷酶Bgp1和β‑葡萄糖苷酶BglPm组成的酶混合物进行生物转化,得到含有人参稀有皂苷Rg3的转化产物;优化后的β‑葡萄糖苷酶BglPm的基因序列为SEQ ID No.2所示,优化后的a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3的基因序列为SEQ ID No.5所示,优化后的β‑葡萄糖苷酶Bgp1的基因序列为SEQ ID No.8所示。

3.一种人参稀有皂苷Rg3的生物转化方法,其特征在于,包括:(1)将人参进行提取得到人参总皂苷提取液;

(2)向人参总皂苷提取液中加入由a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3、β‑葡萄糖苷酶Bgp1和a‑L‑阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2组成的酶混合物进行生物转化,得到含有人参稀有皂苷Rg3的转化产物;优化后的a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3的基因序列为SEQ ID No.5所示,优化后的β‑葡萄糖苷酶Bgp1的基因序列为SEQ ID No.8所示,优化后的a‑L‑阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2的基因序列为SEQ ID No.11所示。

4.按照权利要求1‑3任何一项所述的生物转化方法,其特征在于,所述的生物转化的反应温度是28‑45℃,所述的转化反应时间是4‑48小时;所述的生物转化是在震荡的条件下进行转化反应。

5.按照权利要求4所述的生物转化方法,其特征在于,所述的生物转化的反应温度为

30‑45℃;所述的转化反应时间是8‑24小时。

6.按照权利要求5所述的生物转化方法,其特征在于,所述的生物转化的反应温度为40℃;所述的转化反应时间是12小时。

7.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,所述a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑

3或β‑葡萄糖苷酶Bgp1通过原核表达制备得到,包括:将a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3基因或β‑葡萄糖苷酶Bgp1基因分别与原核表达载体可操作性连接构建得到原核表达载体;将所构建的原核表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。

8.按照权利要求2所述的生物转化方法,其特征在于,所述β‑葡萄糖苷酶BglPm, a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3或β‑葡萄糖苷酶Bgp1通过原核表达制备得到,包括:将β‑葡萄糖苷酶BglPm基因,a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3基因或β‑葡萄糖苷酶Bgp1基因分别与原核表达载体可操作性连接构建得到原核表达载体;将所构建的原核表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。

9.按照权利要求3所述的生物转化方法,其特征在于,所述a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑

3、β‑葡萄糖苷酶Bgp1或a‑L‑阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2通过原核表达制备得到,包括:将a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3基因、β‑葡萄糖苷酶Bgp1基因或a‑L‑阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2基因分别与原核表达载体可操作性连接构建得到原核表达载体;将所构建的原核表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。

10.按照权利要求7所述的生物转化方法,其特征在于,将a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.04mM IPTG诱导24h;将β‑葡萄糖苷酶Bgp1基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.1mM IPTG诱导9h。

11.按照权利要求8所述的生物转化方法,其特征在于,将β‑葡萄糖苷酶BglPm基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是32℃下0.04mM IPTG诱导18h;将a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.04mM IPTG诱导24h;将β‑葡萄糖苷酶Bgp1基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.1mM IPTG诱导9h。

12.按照权利要求9所述的生物转化方法,其特征在于,将a‑L‑阿拉伯呋喃糖酶Abf22‑3基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.04mM IPTG诱导24h;将β‑葡萄糖苷酶Bgp1基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.1mM IPTG诱导9h;将a‑L‑阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是22℃下0.02mM IPTG诱导24h。