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专利号: 201811077606X
申请人: 东北林业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种人参稀有皂苷Rg3的生物转化方法,其特征在于,包括:

(1)将人参进行提取得到人参总皂苷提取液;

(2)向人参总皂苷提取液中加入β-葡萄糖苷酶BglPm,a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3,β-葡萄糖苷酶Bgp1或a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2中的任何一种或多种进行生物转化,得到含有人参稀有皂苷Rg3的转化产物。

2.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,步骤(2)中向人参总皂苷提取液中加入由a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3和β-葡萄糖苷酶Bgp1组成的酶混合物进行生物转化。

3.按照权利要求2所述的生物转化方法,其特征在于,所述的酶混合物中还含有β-葡萄糖苷酶BglPm。

4.按照权利要求2所述的生物转化方法,其特征在于,所述的酶混合物中还含有a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2。

5.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,步骤(2)中向人参总皂苷提取液中加入由β-葡萄糖苷酶Bgp1和a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2组成的酶混合物进行生物转化。

6.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,步骤(2)中向人参总皂苷提取液中加入由β-葡萄糖苷酶Bgp1和β-葡萄糖苷酶BglPm组成的酶混合物进行生物转化。

7.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,所述的生物转化的反应温度是

28-45℃,所述的转化反应时间是4-48小时;所述的生物转化是在震荡的条件下进行转化反应;优选的,所述的生物转化的反应温度为30-45℃;所述的转化反应时间是8-24小时;更优选的,所述的生物转化的反应温度为40℃;所述的转化反应时间是12小时。

8.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,所用到的β-葡萄糖苷酶BglPm来自芽孢杆菌Paenibacillus mucilaginosus KCTC 3870T的β-葡萄糖苷酶BglPm,其基因序列为SEQ ID No.1所示,其氨基酸序列为SEQ ID No.3所示;

所用到的a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3来自于明串珠菌属Leuconostoc sp.22-3,其基因序列为SEQ ID No.4所示,其氨基酸序列为SEQ ID No.6所示;

所用到的β-葡萄糖苷酶Bgp1来源于酯香微杆菌Microbacterium esteraromaticum KACC16318,其基因序列为SEQ ID No.7所示,其氨基酸为SEQ ID No.9所示;

所用到的a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2来源于酯香微杆菌Microbacterium esteraromaticum GS514,其基因序列为SEQ ID No.10所示,其氨基酸为SEQ ID No.12所示;

优选的,优化后的β-葡萄糖苷酶BglPm的基因序列为SEQ ID No.2所示,优化后的a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3的基因序列为SEQ ID No.5所示,优化后的β-葡萄糖苷酶Bgp1的基因序列为SEQ ID No.8所示,优化后的a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2的基因序列为SEQ ID No.11所示。

9.按照权利要求1所述的生物转化方法,其特征在于,所述β-葡萄糖苷酶BglPm,a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3,β-葡萄糖苷酶Bgp1或a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2通过原核表达制备得到,包括:将β-葡萄糖苷酶BglPm基因,a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3基因,β-葡萄糖苷酶Bgp1基因或a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2基因分别与原核表达载体可操作性连接构建得到原核表达载体;将所构建的原核表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。

10.按照权利要求9所述的生物转化方法,其特征在于,将β-葡萄糖苷酶BglPm基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是32℃下0.04mM IPTG诱导18h;将a-L-阿拉伯呋喃糖酶Abf22-3基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.04mM IPTG诱导24h;将β-葡萄糖苷酶Bgp1基因基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是28℃下0.1mM IPTG诱导9h;

将a-L-阿拉伯吡喃糖苷酶Bgp2基因基因在大肠杆菌中进行诱导表达时的条件是22℃下

0.02mM IPTG诱导24h。