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专利号: 2018110922511
申请人: 江苏师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法,其特征在于,包括步骤:S1:构建含脂肪酶基因mrml的能够表达mRML的工程菌株;

S2:培养工程菌株;

S3:经诱导表达获得含米黑根毛霉脂肪酶mRML的发酵液;

S4:将发酵液离心,取上清,调节pH至7.0,之后置于低温环境中,直至上清液表面出现结冰;

S5:向上清液中加入预冷丙酮,静置,弃上清,收集沉淀;

S6:风干沉淀,得米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉。

2.如权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法,其特征在于,所述工程菌株为巴斯德毕赤酵母。

3.如权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法,其特征在于,所述步骤S3中的诱导条件为每24小时补充一次诱导物甲醇,至甲醇终浓度为1.0%(v/v)。

4.如权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法,其特征在于,所述步骤S4具体包括:将发酵液于4℃,5000rpm条件下离心10min,之后取发酵液上清40体积份置于容器中,调节pH至7.0,将容器放置在-20℃的环境内,直至容器内的液体表面出现结冰。

5.如权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法,其特征在于,所述步骤S5具体包括:向容器中加入8体积份-20℃预冷的丙酮,边加边缓慢搅拌,之后-20℃静置10min,再向容器中缓慢加入72体积份-20℃预冷的丙酮,边加边缓慢搅拌,之后-20℃静置2-3h,将容器中的混合液于8000rpm、4℃条件下离心10min,弃上清,收集沉淀。