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专利号: 2018110922634
申请人: 江苏师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法,其特征在于,包括步骤,A1:将含前导肽的脂肪酶基因pro-rml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZα+Mα上构建得到含2拷贝目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml;

A2:将含有2拷贝的目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml分别转到巴斯德毕赤酵母中;

A3:筛选含4拷贝数目的基因的能够表达Pro-RML的巴斯德毕赤酵母,获得生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株。

2.由权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法所制备的生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株。

3.一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉方法,其特征在于,包括步骤,B1:培养权利要求2所述的工程菌株;

B2:经诱导表达获得含米黑根毛霉脂肪酶的发酵液;

B3:从发酵液中分离出米黑根毛霉脂肪酶,经干燥获得米黑根毛霉脂肪酶酶粉。

4.如权利要求3所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉方法,其特征在于,所述步骤B2中的诱导条件为每24小时补充一次诱导物甲醇,至甲醇终浓度为1.0%(v/v)。

5.如权利要求3所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉方法,其特征在于,所述步骤B3具体包括:(1)将发酵液于4℃,5000rpm条件下离心10min,之后取发酵液上清40体积份,调节pH至

4.0,之后将发酵液置于容器中,将容器放置在-20℃的环境内,直至容器内的液体表面出现结冰;

(2)向容器中加入8体积份-20℃预冷的丙酮,边加边缓慢搅拌,之后-20℃静置10min;

(3)向容器中再缓慢加入72体积份-20℃预冷的丙酮,边加边缓慢搅拌,之后-20℃静置

2-3h;

(4)将容器中的混合液于8000rpm、4℃条件下离心10min,弃上清,收集沉淀;

(5)向沉淀中加入2倍于沉淀物体积的预冷丙酮,搅拌混匀,在于4℃,8000rpm条件下离心10min;

(6)重复(5)一次;

(7)将(6)获得的沉淀风干,得米黑根毛霉脂肪酶酶粉。

6.由权利要求3、4或5所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉方法所生产的米黑根毛霉脂肪酶酶粉。