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专利号: 2018111254921
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法,其特征在于,所述水溶性多肽为五肽或者六肽,具体包括:SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO7、SEQ ID NO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO15、SEQ ID NO16、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO20、SEQ ID NO25、SEQ ID NO26中的任意一种或两种以上;

所述方法包括:将白酒酒糟进行前处理、半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽、通过LC-QTOF-MS并利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽;

所述前处理包括:按照酒糟与水质量比2:1添加超纯水,搅拌后第一次离心过滤后,取上清液,第二次离心过滤后,取下层溶液,真空旋转蒸发,浓缩,冻干后复溶至浓度100mg/mL;

所述半制备RP-HPLC的条件为:色谱柱:规格为10mm×250mm,5μm的Xbridge BEH C18反相色谱柱;流动相:A含体积分数0.1%TFA的超纯水、B含体积分数0.08%TFA的乙腈;洗脱程序:0~60min,90%~40%A;60~70min,40%~90%A;

所述LC-QTOF-MS的条件为:色谱柱:2.1mm×100mm,1.7μm BEH C18反相色谱柱;流动相:A100%乙腈、B含体积分数0.1%甲酸的超纯水;洗脱梯度:0~0.1min,2%A;0.1~8min,

2%~40%A;8~10min,40%~80%A;10~12min,80%~100%A;12~12.1min,100%~2%A;

所述利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽,采用正离子[M+H]+和负离子[M-H]–两种模式,对比正负离子模式在同一保留时间下的质谱图,判断母离子m/z的大小。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第一次离心条件为:离心温度3~5℃、离心力3800g、离心时间25~35min;所述第二次离心条件为:离心温度3~5℃,离心力

10000g,离心时间15~25min。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述二次离心过滤分别采用孔径大小分别为3KD和1KD的超滤管进行先后超滤,最终截留分子量>1kD。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,所述半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽,包括:将前处理得到的溶液稀释至浓度20mg/mL;色谱柱:流速:2mL/min;检测波长:214nm;柱温:20℃;进样量:800μL。

5.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,所述利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽,包括:将分离后得到的溶液旋蒸、冻干,并复溶,待UPLC-Q-TOF-MS分析;色谱柱:流速:0.3mL/min;检测波长:200~500nm;柱温:45℃;进样量:5μL;

质谱条件:离子源:电喷雾源;毛细管电压:3500V;锥孔电压:20V;模式:正负离子双模式;离子源温度:100℃;脱溶剂气温度:400℃;碰撞池电压:6V;离子扫描范围:m/z 20~

2000。

6.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,所述半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽,选用波长214nm表征多肽的分离效果。