1.河生肠杆菌生物Ⅰ型(Lelliottia amnigena)ZJB-17002,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 2017598,保藏日期2017年10月23日,地址:中国·武汉·武汉大学,430072。
2.一种权利要求1所述河生肠杆菌生物Ⅰ型ZJB-17002在催化2-N-苯乙酰基-4-[羟基(甲基)磷酰基]-DL-丁酸制备2-氨基-4-[羟基(甲基)磷酰基]-L-丁酸中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用以河生肠杆菌生物Ⅰ型ZJB-17002经发酵培养获得湿菌体为催化剂,以2-N-苯乙酰基-4-[羟基(甲基)磷酰基]-DL-丁酸为底物,以缓冲液为反应介质构成pH8.5的反应体系,在25-55℃,100-200rpm条件下进行转化反应,反应结束后,反应液经分离纯化得到2-氨基-4-[羟基(甲基)磷酰基]-L-丁酸。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应体系中,催化剂用量以湿菌体重量计为10-200g/L,底物初始加入终浓度为10-500mM。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应液分离纯化的方法为:反应结束后,将反应液用二氯甲烷萃取,将水层调pH至1.0-5.0,以1-6.0Bv/h的速度上样进行离子交换层析,先用去离子水洗涤,再用0.2-4.5M的氨水以0.5-3.0Bv/h进行洗脱,收集含目标组分的洗脱液,减压蒸馏至膏状,用甲醇溶解重结晶,取晶体干燥,得到2-氨基-4-[羟基(甲基)磷酰基]-L-丁酸。
6.一种权利要求1所述河生肠杆菌生物Ⅰ型ZJB-17002在催化N-苯乙酰-DL-氨基酸制备N-苯乙酰-L-氨基酸的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述的应用以河生肠杆菌生物Ⅰ型ZJB-17002经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以N-苯乙酰-DL-氨基酸为底物,以缓冲液为反应介质构成pH8.5的转化体系,在25-55℃,100-200rpm条件下进行转化反应,反应结束后,反应液经分离纯化,得到N-苯乙酰-L-氨基酸。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述转化体系中,催化剂用量以湿菌体重量计为20-300g/L,所述底物初始加入终浓度为50-500mM。
9.如权利要求7所述应用,其特征在于所述N-苯乙酰-DL-氨基酸为下列之一:N-苯乙酰-DL-丙氨酸、N-苯乙酰-DL-丝氨酸、N-苯乙酰-DL-谷氨酸、N-苯乙酰-DL-酪氨酸、N-苯乙酰-DL-苏氨酸、N-苯乙酰-DL-缬氨酸、N-苯乙酰-DL-天冬氨酸、N-苯乙酰-DL-甲硫氨酸、N-苯乙酰-DL-亮氨酸、N-苯乙酰-DL-异亮氨酸、N-苯乙酰-DL-苯丙氨酸。
10.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述催化剂如下方法制备:
(1)斜面培养:将河生肠杆菌生物Ⅰ型ZJB-17002接种至斜面培养基,在30℃培养48h,获得斜面菌体;所述斜面培养基终浓度为:甘露醇10g/L,谷氨酸钠7g/L,酵母膏3g/L,K2HPO4
0.75g/L,KH2PO4 0.75g/L,MgSO4 0.5g/L,己内酰胺1g/L,琼脂为20.0g/L,溶剂为去离子水,pH 7.0~7.5;
(2)种子培养:从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基,在30℃培养24h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:甘露醇10g/L,谷氨酸钠7g/L,酵母膏3g/L,K2HPO4
0.75g/L,KH2PO4 0.75g/L,MgSO4 0.5g/L,己内酰胺1g/L,溶剂为去离子水,pH 7.0~7.5;
(3)发酵培养:将种子液以体积浓度1~10%的接种量接种至发酵培养基中,30℃,
150rpm振荡培养60h后,在12000g下离心10min,收集湿菌体;所述发酵培养基组成:甘露醇
10g/L,谷氨酸钠7g/L,酵母膏3g/L,K2HPO4 0.75g/L,KH2PO4 0.75g/L,MgSO4 0.5g/L,己内酰胺1g/L,溶剂为去离子水,pH 7.0~7.5。