1.一种分泌表达海蠕虫透明质酸水解酶的重组酿酒酵母,其特征在于,是将来源于海蠕虫(Capitella teleta)的透明质酸水解酶基因转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中得到的基因工程菌;将缺失了TEF1启动子的pRS305、启动子GAP(m)、信号肽sp23、6个谷氨酰胺短肽和透明质酸水解酶基因连接成环,构成重组表达载体。
2.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母,其特征在于,启动子GAP(m)的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;信号肽sp23的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母,其特征在于,所述透明质酸水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母,其特征在于,所述重组酿酒酵母的宿主包括S.cerevisiae CEN.PK2-1C。
5.权利要求1-4任一所述的重组酿酒酵母的构建方法,其特征在于,具体步骤包括:(1)合成来源于Capitella teleta的透明质酸水解酶基因与启动子GAP(m)序列;
(2)将pRS305载体与透明质酸酶基因连接,获得含有Capitella teleta透明质酸水解酶基因的重组质粒pRS305-HAase;
(3)以重组质粒pRS305-HAase为模板,通过PCR方法获得去除了TEF1启动子的pRS305-HAase核苷酸片段;
(4)利用一步法无缝克隆连接启动子GAP(m)核苷酸片段与缺失TEF1启动子的pRS305-HAase核苷酸片段,获得质粒pGAP(m)-HAase;
(5)以步骤(4)得到的质粒为模板,根据sp23信号肽序列设计引物进行PCR,将PCR产物磷酸化后连接,得到质粒pGAP(m)-sp23-HAase;
(6)以步骤(5)得到的质粒为模板,根据6个谷氨酰胺短肽序列设计引物进行PCR,将PCR产物磷酸化后连接,转化E.coli JM109,克隆得到整合载体pGAP(m)-sp23-6×Gln-HAase;
(7)将步骤(6)中得到的整合载体pGAP(m)-sp23-6×Gln-HAase转化到S.cerevisiae CEN.PK2-1C中,获得重组酿酒酵母菌。
6.根据权利要求5所述的构建方法,其特征在于,启动子GAP(m)的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,信号肽sp23的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
7.根据权利要求5或6所述的构建方法,其特征在于,所述透明质酸水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
8.权利要求1-4任一所述的重组酿酒酵母在生产透明质酸水解酶中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,将重组酿酒酵母接种于YPD培养基中,28-
32℃,200-240r/min活化培养20-24h后,转接至发酵体系中发酵生产透明质酸水解酶。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,按5-15%接种量将活化培养后的培养液转接至含有1L的YPD培养基的3L容积发酵罐中,通气量1-3vvm,28-32℃,400-600r/min,使用氨水控制pH,当发酵液中葡萄糖浓度低于4g/L时,开始流加葡萄糖,使其浓度维持在0.5-
1g/L,发酵90-100h。