1.一种抗肿瘤环肽的制备方法,其特征在于,所述抗肿瘤环肽的结构如式I‑6所示,;
所述方法包括如下步骤:
1)先用15mL的DCM在30‑35℃下浸泡2‑氯三苯甲基氯树脂1000mg 0.5h,抽去DCM;
单个氨基酸的连接反应:接第一个氨基酸前,称取387.0mg的Fmoc‑Phe‑OH氨基酸,用
977μL的DIPEA和10mL DCM浸泡1h进行活化,再接树脂于30‑35℃下反应1‑1.5h得到Fmoc‑Phe‑2‑氯三苯甲基氯树脂;然后用15 mL 20%甲醇体积比的二氯甲烷溶液,30‑35℃下反应
30min,对树脂上未参与反应的位点进行封闭,反应结束后,分别用DCM和DMF洗涤3遍,抽去洗涤液;向反应管中加入15 mL 25% 哌啶体积比的DMF溶液,反应30 min,脱除Fmoc保护基,反应结束后,分别用DCM和DMF洗涤5遍,抽去洗涤液;
重复上述连接氨基酸然后脱除末端的Fmoc保护基然后检测的步骤,依次接入
1000mgFmoc‑Pro‑OH、1000mgFmoc‑Ile‑OH 、1000mgFmoc‑Phe‑OH、1000mgFmoc‑Pro‑OH、
1000mgFmoc‑Ala‑OH、1000mgFmoc‑Leu‑OH 、1000mgFmoc‑Val‑OH,得到Val‑Leu‑Ala‑Pro‑Phe‑Ile‑Pro‑Phe‑2‑氯三苯甲基氯树脂;
2)将化合物Val‑Leu‑Ala‑Pro‑Phe‑Ile‑Pro‑Phe‑2‑氯三苯甲基氯树脂转移至50 mL离心管中,加入15 mL的切割液,0 ℃的条件下,振荡反应2.5 h,再将滤液过滤至茄型瓶中;用旋转蒸发仪去除滤液中的DCM,油泵抽干剩余液体,加入2 mL甲苯,再抽干,即得到淡黄色粉末状化合物Val‑Leu‑Ala‑Pro‑Phe‑Ile‑Pro‑Phe,产率为84%;
3)称取HOAT 75.4 mg溶于2 mL DMF后转移至茄型瓶中,再称取PyAOP288.8 mg溶于100 mL的DCM,转移至茄型瓶中,再加入NMM 123.8 μL;将茄型瓶置于0 ℃的冰水中,用恒压滴液漏斗将溶有100 mg化合物Val‑Leu‑Ala‑Pro‑Phe‑Ile‑Pro‑Phe的100 mL DCM缓慢的滴加到茄型瓶中,氮气保护,滴加完毕后,从冰水中取出茄型瓶,25℃反应过夜;用旋转蒸发仪将反应液抽出,油泵抽干多余的DMF;以甲醇为洗脱剂,收集含有多肽的溶液部分,旋干后得到化合物环[‑Val‑Leu‑Ala‑Pro‑Phe‑Ile‑Pro‑Phe‑];用3倍体积的乙醚进行离心沉降3次,氮气吹干,得到的白色粉末状化合物,用高效液相色谱进一步纯化,获取终产物,步骤1)‑3)的总产率为58%。