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专利号: 2018112695103
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种猪非典型瘟病毒GD2株反向遗传操作系统,其特征在于,该系统包括重组质粒1和重组质粒2,重组质粒1是将SEQ ID NO:1所示的由启动子序列和猪非典型瘟病毒GD2株基因组全长cDNA序列的5’半长片段依次连接组成的序列克隆到载体中构建得到;重组质粒2是将SEQ ID NO:2所示的由猪非典型瘟病毒GD2株基因组全长cDNA序列的3’半长片段和酶切位点序列依次连接组成的序列克隆到载体中构建得到。

2.根据权利要求1所述的反向遗传操作系统,其特征在于,所述启动子为T7启动子。

3.根据权利要求1所述的反向遗传操作系统,其特征在于,所述酶切位点为NheI酶切位点。

4.根据权利要求1所述的反向遗传操作系统,其特征在于,重组质粒1以载体pBR322构建得到,命名重组质粒pBR-APPV5’,其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

5.根据权利要求1所述的反向遗传操作系统,其特征在于,重组质粒2以载体pEGFP-N1构建得到,命名重组质粒pEGFP-APPV3’,其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

6.根据权利要求1所述的反向遗传操作系统,其特征在于,所述系统还包含宿主细胞,猪非典型瘟病毒GD2株能够在该宿主细胞内复制许可。

7.根据权利要求6所述的反向遗传操作系统,其特征在于,所述宿主细胞为PK-15细胞。

8.一种拯救猪非典型瘟病毒GD2株的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)使用权利要求1~5任一反向遗传操作系统中所述的重组质粒1和重组质粒2,进行Overlap PCR,合成猪非典型瘟病毒GD2株基因组全长cDNA;

(2)将步骤(1)获得的cDNA进行体外转录,合成猪非典型瘟病毒基因组RNA;

(3)将步骤(2)获得的RNA转染宿主细胞,从转染的细胞中拯救出猪非典型瘟病毒GD2株。

9.权利要求8所述方法拯救得到的猪非典型瘟病毒GD2株在作为病毒载体和/或在制备预防先天性震颤的疫苗中的应用。