1.一种编码Arxula adeninivorans碱性尿酸氧化酶蛋白的基因,其特征在于:其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1的基因所编码的蛋白质,其特征在于,其氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。
3.一种宿主细胞,其特征在于:它是含有如序列表SEQ ID No.2所述的碱性尿酸氧化酶蛋白质的原核细胞或真核细胞。
4.权利要求2所述的蛋白质在作为尿酸氧化酶中的应用。
5.权利要求2所述的蛋白质在制备降解含尿酸材料中的应用。
6.权利要求2所述的蛋白质在降低食品中尿酸的应用。
7.一种含有碱性尿酸氧化酶的检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括碱性尿酸氧化酶、辣根过氧化物酶、尿酸标准品、缓冲体系和稳定剂,成份组成如下:其中,所述碱性尿酸氧化酶其特征序列如SEQ ID No.2所示;
所述缓冲剂的pH范围为pH 7.0-12.0,优选pH 9.5-10.0,所述缓冲试剂是三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液、三(羟甲基)氨基甲烷-二氨基乙烷四乙酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、三乙醇胺缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、咪唑缓冲液、双甘氨肽缓冲液或甘氨酸-盐酸缓冲液中的一种;
所述稳定剂为乙二醇、丙二醇、甘油、海藻糖、聚糖、聚醇、硫酸铵、牛血清白蛋白BSA、蔗糖或盐中的至少一种。
8.权利要求7所述包含碱性尿酸氧化酶的检测试剂盒在检测血液、尿液中尿酸含量中的应用。
9.权利要求2所述的蛋白质在作为尿酸氧化酶中的应用,其特征在于,所述尿酸氧化酶至少具有如下一种特性:
1)所述尿酸氧化酶由一种亚基组成;
2)所述尿酸氧化酶的反应温度为35℃-45℃;
3)所述尿酸氧化酶的pH值为9.5-10.5,能够耐受pH 8.0-11.0宽泛的碱性环境条件。
10.权利要求2所述的蛋白质在检测样品中尿酸含量中的应用,其特征在于,包括以下步骤:
1)样品由碱性尿酸氧化酶、辣根过氧化物酶、稳定剂、缓冲试剂、4-氨基安替比林和苯酚组成,将以上试剂混合,使之发生如下反应:
2)检测主波长295nm处反应物尿酸的减少量,计算尿酸氧化酶酶活;或者通过H2O2与4-氨基安替比林和苯酚在辣根化物酶过氧化酶的作用下产生的色原,在510nm处检测产物色原的增加量来计算尿酸含量;
其中,步骤1)所述样品具体是按照常规体检抽取的血清、尿液或肌肉组织,或者是水产品如鱼类的肌肉组织,或者是水果蔬菜植物组织;
所述碱性尿酸氧化酶其特征序列如SEQ ID No.2所示;
检测体系pH值在pH 7.0-12、pH 8.0-11.0或是在pH 8.5-10.5的碱性范围内;反应温度在20-60℃、30-50℃、室温或者是37℃,反应时间为1-60min或者是3-30min;
样品与试剂的比例为1/2到1/300或者是1/2到1/20;
所述步骤2)为,将最终反应物置于紫外/可见分光光度分析仪或者半、全自动生化分析仪上,通过产物变化对酶活进行定量的方法,是通过295nm处吸光度变化检测尿酸的变化量,或者在510nm处检测色原的变化量;
定量样品中尿酸含量的方法,是采用标准曲线的方法,通过测定不同浓度标准品尿酸在相同反应体系下吸光度的变化,绘制标准曲线,然后根据样品对应的吸光度变化推算出尿酸的含量。