1.一种基于拉曼-荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c的检测方法,其特征在于,所述检测方法是基于表面增强拉曼散射和荧光共振能量转移的“开-关”转换,通过在AuNTs上组装Cyt c的适配体及其部分互补的修饰荧光团Cy5的DNA构建的纳米传感器实现双重信号的检测;所述拉曼-荧光双模式探针是由AuNTs修饰Cyt c的适配体、与其适配体部分互补配对的修饰Cy5的互补链制得;所述拉曼-荧光双模式探针的制备方法包括如下步骤:(1)制备金种子:将50 μL 25 mM的HAuCl4溶液加入到4.7 mL的0.1M CTAC溶液中,在剧烈搅拌下注入300 μL新鲜制备的预冷的10 mM NaBH4溶液,溶液由淡黄色变成橘色后在室温下静置2 h以消耗过量的NaBH4,备用;
(2)制备AuNTs:将制备的种子用0.1 M CTAC溶液稀释10倍后,接着制备两种生长液:
(2a)将1.6 mL 0.1 M CTAC溶液加入8 mL超纯水中,再加入40 μL 50 mM HAuCl4和15 μL 10 mM NaI,制得生长液A;
(2b)将500 μL 50 mM HAuCl4加入到40 mL 0.05 M CTAC中,然后加入300 μL 10 mM NaI,制得生长液B;
(2c)将40 μL与400 μL的0.1 M 抗坏血酸溶液分别加入到生长液A与B中,并且搅拌至两种溶液由浅黄色至完全透明,然后将100 μL稀释的种子加入到生长液A中,搅拌不超过5 s后,立即将3.2 mL该溶液加入到生长液B中并搅拌5 s,最后将生长液B在室温下静置1 h,1 h后继续向生长液B中添加5 mL 25% CTAC溶液,过夜后吸除上清,将沉淀重悬在5 mL超纯水中;
(3)制备拉曼-荧光双模式探针:
(3a)在重悬的AuNTs中加入SH-PEG-COOH 溶液并且不断搅拌1 h,以3000 rpm的转速离心10 min,将DNA溶液置于高于Tm温度的水浴中5 min;
(3b)然后将Cyt c适配体DNA1溶液加入到AuNTs中,使DNA1终浓度为1 μM,混合液置于摇床中,37℃、120 rpm的条件下孵育过夜后,3000 rpm 15 min离心除去过量反应物,重悬到原体积;
(3c)再加入Cyt c适配体互补链DNA2,使DNA2终浓度为500 nM,混合均匀后置于摇床,于37℃、120 rpm的条件下并孵育过夜;
(3d)离心除去未反应的DNA,重悬后,再加入20 μL细胞膜穿透肽,37℃振荡过夜孵育,最后以3000 rpm的转速离心两次,每次10 min,重悬,备用;
所述的Cyt c的适配体DNA1序列为:5’-SH-AGTGTGAAATATCTAAACTAAATGTGGAGGGTGGGACGGGAAGAAGTTTATTTTTCACACT-3’;
互补链DNA2序列为:5’-ATATTTCACACT-Cy5-3’;
所述检测方法中拉曼检测包括如下步骤:待细胞生长到对数生长期后,将细胞按80000 个/mL的密度接种350 μL到无菌石英片上,细胞培养至贴壁后,吸出旧培养基,加入混匀探针的基本培养基2 mL,与细胞共培养24 h,吸出含有探针的培养基并用PBS清洗三次,然后加入混有相同浓度的AFB1的基本培养基,分别共培养0、0.25、0.5、0.75、1、1.5和2 h,马上进行SERS光谱检测和SERS成像;
所述检测方法中荧光检测包括如下步骤:待细胞生长到对数生长期后,将细胞按40000 个/mL的密度接种500 μL到激光共聚焦专用小皿上,细胞培养至贴壁后,吸出旧培养基,加入混匀组装体的基本培养基500 μL,与细胞共培养24 h,吸出含有探针的培养基并用PBS清洗三次,然后加入混有相同浓度的AFB1的基本培养基,分别共培养0、0.25、0.5、0.75、1、1.5和2 h;然后吸出含有AFB1的培养基,用PBS清洗三次,并用DAPI染色3 min,3 min后清洗DAPI,并马上进行荧光成像。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的活细胞是人的肝癌细胞HepG2。