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专利号: 2018113584517
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种发酵生产维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的方法,其特征在于,该方法将过表达D-山梨醇脱氢酶(SLDH)的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis,伴生菌)与产酸菌普通生酮基古龙酸菌(Ketogulonigenium vulgare)混合培养,发酵制备2-酮基-L-古龙酸;

所述D-山梨醇脱氢酶的基因为Gene Bank中基因序号为BSU_06150、BSU06150、BAMF_RS23545、BAMF_0606、BG04_RS01040、BG04_127、S101359_RS03240、S101359_00640、AB185_RS24215、AB185_24180、SCO1682、SCI30A.03中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述重组地衣芽孢杆菌中山梨醇分解代谢相关基因缺失;所述山梨醇分解代谢相关基因为Gene Bank中基因序号为TRNA_RS40500、BL02489、TRNA_RS40505、BL02490、TRNA_RS40495、BL02487中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法中发酵过程为:

发酵罐按装料系数40%-60%装发酵培养基,以山梨醇计初始投入料为3-5%,8-12h后开始匀速流加剩余3-5%;在培养温度30-37℃、搅拌速度300rpm-600rpm、通气量1.0vvm-

1.5vvm条件下发酵20h-60h;

种子液活菌数为1.5×1010-3×1010,接种量为8%-10%;地衣芽孢杆菌与产酸菌比例为

5:1-8:1。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述过表达D-山梨醇脱氢酶(SLDH)的重组地衣芽孢杆菌的制备方法如下所述:将D-山梨醇脱氢酶基因分别在地衣芽孢杆菌中整合表达和游离表达或将二者结合,构建高表达D-山梨醇脱氢酶的重组地衣芽孢杆菌,进一步通过诱变筛选获得具有高活性D-山梨醇脱氢酶的重组地衣芽孢杆菌;

所述D-山梨醇脱氢酶的基因为Gene Bank中基因序号为BSU_06150、BSU06150、BAMF_RS23545、BAMF_0606、BG04_RS01040、BG04_127、S101359_RS03240、S101359_00640、AB185_RS24215、AB185_24180、SCO1682、SCI30A.03中的一种或多种。