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专利号: 2018113659443
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)分别配制BG110固体培养基和PDA固体培养基;将灭菌后尚在液态的PDA固体培养基和BG110固体培养基混合,得到混合培养基;

(2)在无菌的具有分格的培养皿的分格中分别倒入混合培养基和PDA固体培养基,相邻分格分别倒入一种培养基;混合培养基和PDA固体培养基相邻;在培养皿中的混合培养基和PDA固体培养基的高度与培养皿中形成分格的隔断物的高度一样;

(3)在倒有混合培养基的分格的中心区域接种待筛选的藻,置于人工气候箱中培养,培养至待筛选的藻在培养基上稳定生长,再在倒有PDA固体培养基的分格的中心区域接种立枯丝核菌;

(4)培养;待对照培养皿中的立枯丝核菌长满培养皿时进行观察和测量,如观察到藻可以正常生长,且能抑制病菌向藻所在区域的扩散,即认为该藻具有拮抗立枯丝核菌的能力,并根据抑菌圈的大小判断抑菌强弱,如果被立枯丝核菌丝覆盖则表明没有抗性;

步骤(1)中所述的BG110固体培养基的组成如下:K2HPO4.3H2O 0.04 g/L、MgSO4.7H2O 

0.075 g/L、CaCl2.2H2O 0.036 g/L、柠檬酸0.006 g/L、柠檬酸铁铵 0.006 g/L、EDTA 0.001 g/L、Na2CO3 0.02 g/L、微量元素A5 1mL/L、琼脂15~20g/L;

微量元素A5的组成如下:H3BO3 2.860 g/L、NaMoO4.2H2O 0.021 g/L、MnCl2.4H2O 1.810 g/L、ZnSO4.7H2O 0.222 g/L、CuSO4.5H2O 0.079 g/L、NiSO4.6H2O 0.479 g/L;步骤(1)中所述的PDA培养基和所述的BG110培养基按1:2~18配比混合。

2.根据权利要求1所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于:所述的PDA培养基和所述的BG110培养基按体积比1:10配比混合。

3.根据权利要求1所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的灭菌的条件为115~121℃灭菌15~30min;

步骤(2)中所述的培养皿为直径是90 mm的培养皿。

4.根据权利要求1所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的藻的接种量按形成直径为3~10mm的藻团量计算;

步骤(3)中所述的立枯丝核菌的接种量按接种直径3~8 mm的立枯丝核菌计算。

5.根据权利要求4所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的藻的接种量按形成直径为5 mm的藻团量计算;

步骤(3)中所述的立枯丝核菌的接种量按接种直径5 mm的立枯丝核菌计算。

6.根据权利要求1所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的培养的条件为于23~30℃、2500~3200 lx培养3~5天;

步骤(4)中所述的培养的条件为于23~30℃、2500~3200lx培养。

7.根据权利要求6所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的培养的条件为于25~28℃、3000lx培养4天;

步骤(4)中所述的培养的条件为于25~28℃、3000lx培养。

8.权利要求1~7任一项所述的筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法在筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻中的应用。