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专利号: 2018113766233
申请人: 沈阳农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的新方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)制备种子液:将酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶基因工程菌株置于含葡萄糖的YNB‑CAA培养基中,培养至菌体OD600=2.0~3.0时,回收菌体,得种子液;α‑半乳糖苷酶基因来源于oryza sativa L. subsp.  japonica var. Nipponbare, Genbank编号: AP005737.3;

2)诱导表达:于10L发酵罐中,将种子液以2~5 %的接种量,接种于含半乳糖和补充氮源的YNB‑CAA培养基中,搅拌转速为100rpm,以0.5L/min速度通入空气,20~30℃下,诱导表达30~40 h,离心收集菌体;在诱导表达全过程中,以流加方式持续加入半乳糖,保持10L发酵罐中,培养基中半乳糖浓度为1~3 %;氮源为硫酸铵,其浓度范围为0.05%‑0.5%。

2.根据权利要求1所述的一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的新方法,其特征在于,所述的酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶基因工程菌株的制备方法如下:将α‑半乳糖苷酶基因与载体pYD1连接后获得重组质粒,将重组质粒转化至酵母EBY100中,获得酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶基因工程菌株。

3.根据权利要求1所述的一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的新方法,其特征在于,步骤1)中,所述的含葡萄糖的YNB‑CAA培养基的组成为:0.67%YNB,0.5%酸水解酪蛋白,2%葡萄糖,余量水。

4.根据权利要求1所述的一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的新方法,其特征在于,步骤2)中,所述的含半乳糖和补充氮源的YNB‑CAA培养基的组成为:0.67%YNB,0.5%酸水解酪蛋白,2%半乳糖,0.05~0.5%补充氮源,余量水。