欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2018113974414
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-04
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种提高鱼鳞明胶品性的方法,包括以下步骤:

(1)将含有P4H编码基因的微生物的DAN序列除去终止密码子;

(2)在除去了终止密码子的P4H编码基因的两端分别加上限制性酶切位点;

(3)以表达质粒作为载体,采用限制性内切酶将P4H的编码基因及载体进行消化产生互补的粘性末端,再在连接酶的作用下连接起来构建重组质粒;

(4)将重组质粒转入感受态宿主中,筛选阳性克隆子,进行诱导高效表达P4H;

(5)分离纯化P4H;

(6)将鱼鳞明胶溶解于缓冲液中,加入纯化的P4H,并加入所需的其他物质,混匀并在一定温度下反应一段时间,然后灭活,得到改性的鱼鳞明胶。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(1)中,含有P4H编码基因的微生物是荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(2)中,限制性酶切位点是XhoI和EcoRI限制性酶切位点。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(3)中,选择pET-28(a)质粒作为表达载体。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(4)中,通过热激方法将重组质粒转入感受态宿主大肠杆菌(Escherichia coli)或E.coli–Roestta中,采用抗性、菌落PCR筛选阳性克隆子。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(5)中,采用Ni柱进行亲和层析纯化或分离纯化包涵体。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(6)中,缓冲液是pH为5.5、浓度为

0.02mol/L的Tris/HCl缓冲液;所需的其他物质是α-酮戊二酸、L-抗坏血酸和FeSO4·7H20;

反应温度是26℃,反应时间是30min。

8.一种改性的鱼鳞明胶,其特征在于:由权利要求1~7任一权利要求所述的方法得到。