1.一种提高鱼鳞明胶品性的方法,包括以下步骤:
(1)将含有P4H编码基因的微生物的DAN序列除去终止密码子;
(2)在除去了终止密码子的P4H编码基因的两端分别加上限制性酶切位点;
(3)以表达质粒作为载体,采用限制性内切酶将P4H的编码基因及载体进行消化产生互补的粘性末端,再在连接酶的作用下连接起来构建重组质粒;
(4)将重组质粒转入感受态宿主中,筛选阳性克隆子,进行诱导高效表达P4H;
(5)分离纯化P4H;
(6)将鱼鳞明胶溶解于缓冲液中,加入纯化的P4H,并加入所需的其他物质,混匀并在一定温度下反应一段时间,然后灭活,得到改性的鱼鳞明胶。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(1)中,含有P4H编码基因的微生物是荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(2)中,限制性酶切位点是XhoI和EcoRI限制性酶切位点。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(3)中,选择pET-28(a)质粒作为表达载体。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(4)中,通过热激方法将重组质粒转入感受态宿主大肠杆菌(Escherichia coli)或E.coli–Roestta中,采用抗性、菌落PCR筛选阳性克隆子。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(5)中,采用Ni柱进行亲和层析纯化或分离纯化包涵体。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在步骤(6)中,缓冲液是pH为5.5、浓度为
0.02mol/L的Tris/HCl缓冲液;所需的其他物质是α-酮戊二酸、L-抗坏血酸和FeSO4·7H20;
反应温度是26℃,反应时间是30min。
8.一种改性的鱼鳞明胶,其特征在于:由权利要求1~7任一权利要求所述的方法得到。