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专利号: 2018114509829
申请人: 江苏师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,包括步骤:

S1:在MoS2纳米层表面原位合成Au NPs,形成Au NPs@MoS2复合纳米材料;

S2:取Au NPs@MoS2纳米复合材料滴涂到玻碳电极表面,干燥后得Au NPs@MoS2纳米复合材料修饰的玻碳电极;

S3:将相同浓度的5′端修饰二茂铁的探针probe 1-Fc和3′端修饰亚甲基蓝的探针probe 2-MB于水浴中反应,得到双信号串联体探针,其中,所述probe 1-Fc的序列为5′-Fc-CAATTTCCTTCCACTCGTCCGGAGGAAGGTGCCG-3′,所述probe 2-MB的序列为5′-CGAGTGGAAGGAAATTGCGGCACCTTCCTCCGGA-MB-3′;

S4:将步骤S2得到的电极浸泡在捕获探针capture DNA的溶液中,过夜,其中capture DNA的序列为5′-SH-TTTTCATCCAAATACTCCACACG-3′;

S5:将电极浸入含有待测甲基化基因的缓冲溶液中;

S6:将步骤S5中得到的电极浸入双信号串联体探针溶液中,得双信号超级三明治电化学传感器;

S7:将步骤S6得到的双信号超级三明治电化学传感器的工作电极、饱和甘汞电极和铂电极构成三电极体系,置于磷酸盐缓冲溶液和氮气氛围中进行检测。

2.根据权利要求1所述的双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,所述步骤S1具体包括:在聚乙烯吡咯烷酮环境中,将氯金酸缓慢注入MoS2纳米层悬浮液中,剧烈震荡几分钟,室温下反应得到酒红色Au NPs@MoS2纳米复合材料。

3.根据权利要求1所述的双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,所述步骤S2具体包括:取10μL Au NPs@MoS2纳米复合材料滴涂到玻碳电极表面并于室温下在空气中自然避光干燥,得到Au NPs@MoS2纳米复合材料修饰的玻碳电极。

4.根据权利要求1所述的双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,所述步骤S3具体包括:将相同浓度的5′端修饰二茂铁的探针1probe 1-Fc和3′端修饰亚甲基蓝的探针2probe 2-MB于37℃水浴中反应2h,得到双信号串联体探针,probe 1-Fc的序列为5′-Fc-CAATTTCCTTCCACTCGTCCGGAGGAAGGTGCCG-3′,probe 2-MB的序列为5′-CGAGTGGAAGGAAATTGCGGCACCTTCCTCCGGA-MB-3′。

5.根据权利要求1所述的双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,所述步骤S4具体包括:将S2得到的电极浸泡在捕获探针capture DNA的溶液中,4℃过夜,capture DNA的序列为5′-SH-TTTTCATCCAAATACTCCACACG-3′。

6.根据权利要求1所述的双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,所述步骤S5具体包括:将电极浸入含有待测甲基化基因的缓冲溶液中,37℃反应

1h。

7.根据权利要求1所述的双信号超级三明治电化学传感器检测基因甲基化的方法,其特征在于,所述步骤S6具体包括:将步骤S5中得到的电极浸入双信号串联体探针溶液中,37℃杂交反应2h。