1.一种固定化蔗糖磷酸化酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌经发酵培养,离心收集上清,制得蔗糖磷酸化酶粗酶液;
(2)以5 15g氨基化树脂LX‑1000EA或LX‑1000HA为固定化载体,加入35 45mL、0.1 M、 ~ ~
pH 8的PBS缓冲液,在25 28℃温度下,200 rpm震荡15 min后在室温静置0.5 1.5 h,用滤纸~ ~
过滤后加入45 55ml的2%戊二醛中,在25 28℃温度下,200 rpm震荡4 6 h,用蒸馏水洗3次,~ ~ ~
洗去残留戊二醛,过滤得到处理后的氨基化树脂LX‑1000EA和LX‑1000HA;
(3)称取1 g步骤(2)中处理过的氨基化树脂LX‑1000EA或LX‑1000HA,加入步骤(1)中得到的蔗糖磷酸化酶,加酶量为4 11 U/g,于25 28℃,100 rpm震荡固定4 24 h,得到LX‑~ ~ ~
1000EA固定化SPase和LX‑1000HA固定化SPase。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述发酵培养是以枯草芽孢杆菌SPase/pBSMuL3为生产菌株,在LB培养基中35 40℃培养8 10h,然后转接至TB发酵培养基中25 35~ ~ ~
℃培养45 50h。
~
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述加酶量为4 U/g、6 U/g、7 U/g、9 U/g或11 U/g。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述固定时间为4 h、8 h、12 h、16 h、20 h或24 h。