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专利号: 2018115240133
申请人: 河南科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种石油污染土壤微生物修复试剂,其特征在于,包括如下原料:微生物试剂、物理调节试剂、辅料试剂;

所述微生物试剂的体积份:所述物理调节试剂的重量份:所述辅料试剂的重量份比例为(3.8‑7L)∶(1.6‑3kg)∶(1.5‑2.8kg);

所述微生物试剂包括如下体积份的菌种:黑曲霉菌10‑15份、假单胞菌10‑20份、产朊假丝酵母菌10‑15份、粘红酵母菌8‑10份;

所述假单胞菌为铜绿假单胞菌;

所述微生物试剂中任一菌种的有效活菌数为1‑2亿/毫升;

所述物理调节试剂包括如下重量份原料:生物炭8‑15份、白云石粉8‑15份;

所述辅料试剂包括如下重量份的原料:槐糖脂10‑20份、尿素2‑3份、葡萄糖3‑5份。

2.根据权利要求1所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂,所述白云石粉的粒径为

80‑100目。

3.根据权利要求1‑2中任一项所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂,所述生物炭的粒径为60‑80目。

4.一种石油污染土壤微生物修复试剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤(1):按照权利要求1‑2任一项所述石油污染土壤微生物修复试剂的重量份比例称取所述物理调节试剂和所述辅料试剂;

步骤(2):将黑曲霉菌、假单胞菌、产朊假丝酵母菌、粘红酵母菌分别进行活化、扩培;

步骤(3):将扩培后获得的各个菌种的菌种液按照权利要求1‑2任一项所述石油污染土壤微生物修复试剂的体积份比例混合均匀,获得微生物混合液;

步骤(4):将步骤(3)获得的微生物混合液混合均匀,加入尿素和葡萄糖混合均匀,静置培养10‑15h,获得微生物修复液;

步骤(5):将白云石和生物炭混合均匀,经高温灭菌,冷却至室温,获得物理调节试剂成品;

步骤(6):将步骤(4)所述的微生物修复液和步骤(5)所述的物理调节试剂成品以及辅料试剂混合均匀,获得石油污染土壤微生物修复试剂成品。

5.根据权利要求4所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述黑曲霉菌的活化步骤为:将黑曲霉接到改良马丁培养基摇瓶中,在25~

30℃培养下振荡培养约5‑8天;

所述黑曲霉菌的扩培步骤为:将活化后的菌液划线到改良马丁琼脂斜面上,在25~30℃静置培养5‑7天。

6.根据权利要求4所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述假单胞菌的培养基为:明胶冻:15‑18g/L,蛋白胨8‑9g/L,K2SO412‑14g/L,MgCl21.5‑1.6g/L,琼脂16‑20g/L,溴化十六烷基三甲胺0.3‑0.4g/L,余量的水;pH为6‑8;

培养条件为:将所述假单胞菌接种于所述培养基上,在35‑37℃培养49‑52h。

7.根据权利要求4所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述产朊假丝酵母菌的活化培养基为:葡萄糖20g/L,蛋白胨20g/L,酵母粉

10g/L,余量的水;

所述产朊假丝酵母菌的基本培养基为:葡萄糖30g/L,(NH4)2SO45g/L,酵母粉3g/L,MgSO40.4g/L,K2HPO41.0g/L,余量的水;

培养条件为:先在活化培养基上接种,在27‑28℃下,摇荡培养15‑20h;

再在基本培养基上,30‑32℃下继续静置培养24‑26h。

8.根据权利要求4所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述粘红酵母菌的培养基为:葡萄糖浓度为15g/L,酵母膏浓度为2‑3g/L,麦芽膏浓度为3‑5g/L,硫酸铵浓度为2‑3g/L,磷酸二氢钾浓度为0.5‑0.8g/L,七水合硫酸镁浓度为0.26‑0.28g/L,余量的水;pH为6‑8;

培养条件为:在28‑32℃下静置培养6‑9天。

9.根据权利要求4所述的一种石油污染土壤微生物修复试剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中所述高温灭菌温度为130‑150℃。