1.一种基于酶联免疫鉴别丝织品残片的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）蚕丝特异性抗体的制备：称取桑蚕丝和柞蚕丝，经脱胶、溶解、透析、纯化和冷冻干燥后，分别得到桑蚕丝丝素蛋白粉末和柞蚕丝丝素蛋白粉末；将两种丝素蛋白粉末分别溶解在PBS中注射进SPF级Balb/C纯种雌性小鼠体内，经多次脾脏免疫后，将脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经克隆、筛选、培养和纯化后，分别得到桑蚕丝丝素蛋白单克隆抗体和柞蚕丝丝素蛋白单克隆抗体；

2）Fab片段抗体的制备：先在分离柱中对固定化木瓜蛋白酶进行活化，同时将步骤1）中所得两种抗体分别在buffer交换柱中进行前处理，得到两种抗体溶液；将两种抗体溶液分别加入到活化的固定化木瓜蛋白酶中，拧紧柱子盖子，置于35‑39℃恒温震荡孵化箱中酶解反应，采用亲和层析法纯化和凝胶过滤层析柱对酶解产物进行分离纯化后，得到桑蚕丝丝素蛋白Fab片段抗体和柞蚕丝丝素蛋白Fab片段抗体；

两种抗体的前处理的方法具体如下：将Buffer交换柱放入离心管内，2000‑4000rpm 离心1‑3 min，弃去离心出来的存储液，加入 0.8‑1.2mL 18‑22 mM半胱氨酸消化液，2000‑

4000rpm离心1‑3min，弃去离心出来的液体，重复离心2‑4次；吸取 0.4‑0.6m L抗体加入到柱子中，并将柱子放入新的离心管中，2000‑4000rpm离心1‑3min，收集离心出来含半胱氨酸的抗体溶液，待用；

3）Fab‑Au NP复合物的制备：将步骤2）所得两种Fab片段抗体进行硫醇化处理后，分别取50‑80 μL加入到Au NP溶液中，于35‑39℃恒温震荡孵化箱中反应40‑50min，11000‑

14000rpm 离心10‑20min后，重新分散在PBST中，得到Fab‑BM‑Au NP复合物和Fab‑AP‑Au NP复合物；

Fab片段抗体硫醇化的方法具体如下：按体积比1:8‑12将10μM HS−(CH2)10−N‑羟基琥珀酰亚胺基‑11‑巯基十一酸酯的四氢呋喃溶液与抗体 Fab片段溶液混合，在室温下搅拌40‑

50min；

4）包被抗原的制备：按固液比0.8‑1.2g/100mL将丝织品残片溶于钙醇溶液中，在96‑

100℃下加热1.5‑2 h，得到蚕丝蛋白溶液；取部分蚕丝蛋白溶液，加入Na2CO3/NaHCO3缓冲液，并于6000‑10000rpm离心5‑15min，取上清液作为抗原包被液，抗原包被液浓度为1mg/mL；

5）抗原包被和封闭：将抗原包被液加入96孔板中，每组5个孔，每孔100 μL，加入两组形成实验组1、2，实验组1后续加入Fab‑BM‑Au NP 复合物，实验组2后续加入Fab‑AP‑Au NP复合物，并设立只加入Na2CO3/NaHCO3缓冲液的阴性对照组、用BSA代替Fab‑Au NP复合物的空白对照组和含有丝素蛋白溶液的阳性对照组，于1‑5℃过夜包被，弃去包被液，洗涤；加入

0.8‑1.2wt% BSA，于35‑39 ℃ 孵育1‑3 h，封闭掉多余的结合位点后，弃去封闭液，洗涤；

6）免疫结合：将步骤3）中所得Fab‑BM‑Au NP复合物和Fab‑AP‑Au NP复合物稀释为Fab‑BM‑Au NP复合物溶液和Fab‑AP‑Au NP复合物溶液，实验组1每孔加入100 μL Fab‑BM‑Au NP复合物溶液，实验组2每孔加入100 μL Fab‑AP‑Au NP复合物溶液，空白对照组加入等量PBST，于35‑39℃孵育0.5‑1.5 h，弃去后洗涤；每孔加入100 μL过氧化辣根酶标记的二抗，于35‑39℃孵育0.5‑1.5 h，弃去后洗涤；

7）TMB显色：向孔板中分别加入50 μL A液和B液，置于黑暗环境下反应8‑12 min，每孔加入100 μL 2mol/L H2SO4终止反应；

8）吸光度测量；将孔板置于酶标仪中，读取450 nm处的吸光度数值，将孔板的阴性对照组OD均值加上 3×标准偏差作为实验的cut‑off值：若实验组1的OD均值>阴性对照组的cut‑off值，则丝织品残片为桑蚕丝；若实验组2的OD均值>阴性对照组的cut‑off值，则丝织品残片为柞蚕丝。

2.如权利要求1所述的基于酶联免疫鉴别丝织品残片的方法，其特征在于，步骤2）中，固定化木瓜蛋白酶活化的方法具体为：将0.2‑0.3mL木瓜蛋白酶溶液加入0.7‑0.9 mL分离柱中，将分离柱放入离心管内，8000‑12000 rmp离心0.5‑1.5 min，弃去离心出来的蛋白储存液，加入0.4‑0.6 mL 18‑22mM半胱氨酸消化液，重复离心，弃去离心出来的液体，用橡胶管密封分离柱底部，待用。

3.如权利要求1所述的基于酶联免疫鉴别丝织品残片的方法，其特征在于，步骤2）中，酶解制备Fab片段抗体的具体条件如下：酶和抗体的质量比为 0.0080‑0.0090 mg酶/mg IgG，采用20 mM Cys浓度的消化液，酶解时间7.5‑8.5h；孵育完成后，将分离柱放入离心管中，8000‑12000 rpm 离心1‑3 min，收集离心出来的酶解液，再加入0.25 mL PBS 到柱子中，放入离心管中，8000‑12000rpm离心1‑3min，重复清洗两次，将离心出来的液体计入到酶解液中，共得到1 mL的酶解液。

4.如权利要求1所述的基于酶联免疫鉴别丝织品残片的方法，其特征在于，步骤2）中，Fab片段抗体的分离纯化方法具体如下：用Protein A Plus柱除去抗体Fc片段，收集含有Fab片段的流出物；然后将流出物在20mM Tris、25mM NaCl中透析后，在HiTrap Q FF柱上通过阴离子交换色谱进一步纯化，用20mM Tris、1000mM NaCl梯度洗脱，通过在PBS中的Superdex 200柱上的尺寸排阻色谱法进一步纯化Fab片段抗体。

5.如权利要求1所述的基于酶联免疫鉴别丝织品残片的方法，其特征在于，步骤4）中，钙醇溶液中各物质摩尔比为CaCl2: H2O: C2H5OH=1:7.5‑8.5:1.5‑2.5。

6.如权利要求1或5所述的基于酶联免疫鉴别丝织品残片的方法，其特征在于，步骤4）中，丝织品残片与钙醇溶液的浴比为1:90‑110。