1.一种基于转录组测序开发的黄杜鹃EST-SSR引物对，其特征在于，在检测过程中使用

30对引物，所述引物分别为：

2.根据权利要求1所述的黄杜鹃EST-SSR引物对，其特征在于，所述引物对退火温度为：

3.权利要求1或2所述的黄杜鹃EST-SSR引物对的下述A1-A6中的任一种用途：A1、所述EST-SSR引物对在构建黄杜鹃遗传图谱中的应用；

A2、所述EST-SSR引物对在黄杜鹃种质鉴定中的应用；

A3、所述EST-SSR引物对在黄杜鹃育种中的应用；

A4、所述EST-SSR引物对在黄杜鹃遗传多样性分析中的应用；

A5、所述EST-SSR引物对在黄杜鹃亲缘关系分析中的应用；

A6、所述EST-SSR引物对在黄杜鹃分子标记辅助育种中的应用。

4.一种鉴定黄杜鹃亲缘关系和遗传特性的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的30对EST-SSR引物。

5.一种基于转录组测序开发黄杜鹃EST-SSR引物的方法，其特征在于，包括：(1)选取黄杜鹃盛花期新鲜花瓣材料，获取后干冰速冻并迅速转移至-70度冰箱保存；

采用高盐Trizol试剂和RNA结合柱的方法提取总RNA；

(2)利用链特异性转录组文库构建试剂盒对总RNA先进行mRNA磁珠富集；将富集到的mRNA进行双链cDNA合成、末端修复和接头连接；再用USER酶降解cDNA第二链，保留真实转录的mRNA第一链信息；经PCR扩增和2.5％的琼脂糖凝胶电泳，回收300-500bp范围的片段，即得到测序文库；再利用Illumina Hiseq2500 PE125进行高通量RNA-seq测序；

(3)采用FASTX和CUTADAPT软件过滤数据，并采用Cufflinks软件进行数据组装得到Unigene，将其作为后续SSR引物开发的背景数据；

(4)使用MISA软件对Unigene进行SSR位点搜索，搜索标准为：二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸、六核苷酸最少重复次数分别为10次、7次、5次、5次、5次，筛选出符合SSR引物设计的序列；

(5)利用primer 3.0软件对含有EST-SSR位点且侧翼序列大于50bp的Unigene序列进行引物设计，引物退火温度54-65℃之间，PCR产物大小100-250bp，引物长度19-23nt之间，CG含量40％-60％，避免引物产生二聚体结构和引物错配；

(6)挑选合成步骤(5)设计的EST-SSR引物对，对黄杜鹃种群进行PCR扩增和6％PAGE凝胶电泳检测，验证EST-SSR引物对的有效性和通用性。

6.权利要求1或2所述的引物对以黄杜鹃的基因组为模板扩增得到的分离的EST-SSR标记。