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专利号: 2018115637792
申请人: 长沙学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.通过细胞培养获得栀子苷的方法,包括如下步骤:

A.栀子坐果期,当栀子果实的直径为2-3mm时,用浓度为0.6-1.2%的秋水仙素溶液处理栀子果,处理时长24-36小时,处理结束后,用清水对存活的果实进行喷雾淋洗;

B.采摘未成熟的新鲜栀子果实拨开取其种子并消毒,通过无菌操作将消毒处理的种子拨去种皮,并用解剖刀将脱皮的栀子仁按横切面切成两半,接种在脱分化培养基上,25℃左右室温下培养7-10天,获得种仁愈伤组织;

C.多倍体细胞系接种在MS固体培养基中,继代培养三次以上,每次继代培养的时间为

7-10天;

D.得到的多倍体细胞接种在合成培养基中,25℃左右室温下培养10-20天,得到富集栀子苷次生代谢产物的细胞;

这里用A-D表示这些步骤的先后次序。

2.根据权利要求1所述的方法,其中步骤A还可以为:对开花期的栀子进行诱导,具体做法是每天用浓度为0.6-1.2%的秋水仙素喷洒花芽,持续时间为3-9天。

3.根据权利要求1或者2所述的方法,其特征在于,所述步骤A中秋水仙素溶液中含有2-

6mg/TDZ。

4.根据权利要求3所述的方法,步骤B脱分化培养基是在MS培养基中添加0.5mg/L的2,

4-D、0.25mg/L6-BA,1.0-3.0mg/L的辅酶A、30-40mg/L的蔗糖得到的培养基。

5.根据权利要求4所述的方法,步骤C中继代培养用的培养基为在MS培养基的基础上添加1.0-3.0mg/L的NAA和2.0-4.0mg/L6-BA得到的培养基。

6.根据权利要求5所述的方法,步骤D合成培养所用的培养基在MS液体培养基中添加苯丙氨酸400mg/L,酪氨酸350mg/L,5-氮杂胞苷30-60uM,蔗糖30-60g/L,pH调整到5.5-6.5。