1.提高栀子细胞中栀子苷含量的方法,包括如下步骤:
A、采摘未成熟的新鲜栀子果实拨开取其种子并消毒,通过无菌操作将消毒处理的种子拨去种皮,并用解剖刀将脱皮的栀子仁按横切面切成两半,用0.1-0.5%的秋水仙碱溶液浸泡8-12h;
B、处理后的栀子仁接种在脱分化培养基上,25℃左右室温下培养7-10天,获得含有多倍体细胞的愈伤组织;
C、多倍体细胞系接种在MS固体培养基中,继代培养三次以上,每次继代培养的时间为
7-10天;
D、多倍体细胞接种在合成培养基中,25℃左右室温下培养10-20天,得到富集栀子苷次生代谢产物的细胞;
在此用A-D来表示步骤的先后次序。
2.根据权利要求1所述的方法,其中步骤A也可以按照如下方法实现:采摘未成熟的新鲜栀子果实消毒处理,用0.1-0.5%的秋水仙碱溶液浸泡5-7天,通过无菌操作拨开果实取其种子,拨去种皮并用解剖刀将脱皮的栀子仁按横切面切成两半待用。
3.根据权利要求2所述的方法,所述步骤B中脱分化培养基是在MS培养基中添加0.5mg/L的2,4-D、0.25mg/L6-BA,1.0-3.0mg/L的辅酶A、30-40mg/L的蔗糖得到的培养基。
4.根据权利要求3所述的方法,所述步骤C中继代培养用的培养基在MS培养基的基础上添加1.0-3.0mg/L的NAA和2.0-4.0mg/L6-BA得到。
5.根据权利要求4所述的方法,所述步骤D合成培养所用的培养基在MS液体培养基中添加苯丙氨酸400mg/L,酪氨酸350mg/L,5-氮杂胞苷30-60uM,蔗糖30-60g/L,pH调整到5.5-
6.5。