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专利号: 2018115681085
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.芽孢杆菌(Bacillus sp.)WZZ006,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 2017621,保藏日期2017年10月23日,地址为中国,武汉,武汉大学,邮编430072。

2.一种权利要求1所述芽孢杆菌WZZ006在拆分外消旋5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-

1H-茚-2-羧酸甲酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用为:以芽孢杆菌WZZ006经发酵培养获得的湿菌体冷冻干燥后的干菌体为催化剂,以外消旋5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-

1H-茚-2-羧酸甲酯为底物,以pH值5.0~10.0的缓冲液为反应介质,在20~45℃、100~

300r/min条件下反应完全后,获得S-(+)-5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述底物初始浓度以缓冲液体积计为4.2~

200mM,干菌体加入量以缓冲液体积计为2~10g/L。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:

(1)斜面培养:将芽孢杆菌WZZ006接种至斜面培养基,在30℃、180r/min条件下培养

24h,获得斜面菌体;斜面培养基组成:牛肉膏3g/L,蛋白胨10g/L,NaCl1g/L,琼脂粉15~

20g/L,pH7.0,溶剂为去离子水;

(2)种子培养:取斜面菌体接种于种子培养基,在30℃、180r/min条件下培养24h,获得种子液;种子培养基组成:牛肉膏3g/L,蛋白胨10g/L,NaCl1g/L,pH 7.0~7.2,溶剂为去离子水;

(3)发酵培养:在无菌条件下,取种子液以体积浓度1-2%的接种量接种于发酵培养基中,在30℃、180r/min条件下培养24h,获得发酵液,取发酵液在10000rpm离心10min,弃上清液,收集湿菌体,用0.2M pH7.0的磷酸盐缓冲液洗涤3次,收集菌体真空冷冻干燥,获得冻干菌粉;发酵培养基组成为:葡萄糖15g/L,牛肉膏15g/L,K2HPO4·3H2O 6g/L,KH2PO4 3g/L,MgSO4·7H2O 1.0g/L,NaCl 0.5g/L,pH 6.5,溶剂为去离子水。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述分离纯化的方法为:反应完毕后得到的转化液,10000rpm离心10min后上层溶液真空旋蒸至干,获得浓缩物;将浓缩物用二氯甲烷溶解,采用正相硅胶柱层析,用体积比1:3的乙酸乙酯:石油醚进行洗脱,流速8ml/min,TLC跟踪检测,收集Rf=0.30的组分,减压浓缩至干,得产物S-(+)-5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯。