1.一种古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1）蚕丝特异性抗体的制备：称取桑蚕丝，经脱胶、溶解、透析、纯化和冷冻干燥后，得到桑蚕丝丝素蛋白粉末；将桑蚕丝丝素蛋白粉末溶解在PBS中注射进SPF级Balb/C纯种雌性小鼠体内，经多次脾脏免疫后，将脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经克隆、筛选、培养和纯化后，得到桑蚕丝丝素蛋白单克隆抗体；

2）Fab片段抗体的制备：先在分离柱中对固定化木瓜蛋白酶进行活化，同时将步骤1）中所得抗体在buffer交换柱中进行前处理，得到抗体溶液；将抗体溶液加入到活化的固定化木瓜蛋白酶中，拧紧柱子盖子，置于35‑39℃恒温震荡孵化箱中酶解反应，采用亲和层析法纯化和凝胶过滤层析柱对酶解产物进行分离纯化后，得到桑蚕丝丝素蛋白Fab片段抗体；

3）Fab‑BM‑Au NP复合物的制备：将步骤2）所得桑蚕丝丝素蛋白Fab片段抗体进行硫醇化处理后，分别取50‑80 μL加入到Au NP溶液中，于35‑39℃恒温震荡孵化箱中反应40‑

50min，11000‑14000rpm 离心10‑20min后，重新分散在PBST中，得到Fab‑BM‑Au NP复合物；

4）称取古代丝织品残片作为样品，以1:90‑110的浴比在0.4‑0.6wt%的Na2CO3溶液中煮沸20‑40min，重复两次完成脱胶，样品用去离子水小心清洗3‑5次，放入35‑39℃烘箱低温烘干；

5）称取步骤4）中处理过的古代丝织品残片，浸入钙醇溶液中加热溶解，经透析、过滤和冷冻干燥后，得到丝素蛋白粉末，待用；

6）取步骤5）所得丝素蛋白粉末，溶于Na2CO3/NaHCO3缓冲液中，得到8‑12mg/mL的蛋白溶液，将蛋白溶液与还原性上样缓冲液5X loading以3.5‑4.5:1的体积比混合，在96‑100℃加热8‑12min，进行蛋白变性处理，冷却至室温后，于6000‑10000rpm 离心3‑7min，取上清液作为电泳样品；

7）电泳：将电泳样品和蛋白质Marker加入制备好的免染胶加样孔中，免染胶上层为浓缩胶，下层为分离胶；在恒压条件下进行电泳：80 V跑浓缩胶，8‑12min后120 V跑分离胶，直至样品跑至凝胶底部，停止电泳，将凝胶取出后，放入化学发光仪中观察凝胶图像；

8）转印：裁剪一张尺寸大于凝胶的PVDF膜，一角做标记，用甲醇浸泡0.5‑1.5 min进行活化处理后，将膜与海绵片、滤纸一起放在转印缓冲液中浸泡20‑40 min，而后按照“海绵片—滤纸—凝胶—PVDF膜—滤纸—海绵片”的顺序，搭建转印“三明治”，并将其放入转移装置中，倒入转印缓冲液后，在冰浴条件下200 ‑300 mA恒流转印1.5‑2 h，转印完成后，将膜取出，放入化学发光仪中观察转印情况；

9）免疫：将转印完成的PVDF膜放在抗体孵育盒中，加入4‑6%的脱脂奶粉TBST溶液封闭

0.5‑1.5 h，加入Fab‑BM‑Au NP复合物稀释溶液，在室温条件下摇床孵育0.5‑1.5 h；而后用TBST洗涤3次，每次5‑10 min，加入HRP标记的二抗稀释溶液，于室温条件下摇床孵育0.5‑

1.5 h，重复洗涤步骤；

10）显色：将免疫后的PVDF膜浸入ECL显色液中，避光4‑6 min，将PVDF膜放入化学发光仪中成像，观察免疫条带，若可观察到免疫条带，则表明古代丝织品残片为桑蚕丝。

2.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤5）中，丝素蛋白粉末的制备方法具体如下：将古代丝织品残片以1:45‑55的浴比浸入摩尔比为CaCl2: H2O: C2H5OH的钙醇溶液中，在96‑98℃ 下加热1‑2 h，然后用截留分子量2000的透析袋将得到的蛋白溶液于1‑5℃条件下透析40‑60 h，除去溶剂小分子；将透析后的蛋白溶液进行过滤处理，除去未溶解的杂质分子，得到纯净的丝素蛋白溶液，经冷冻干燥后，得到丝素蛋白粉末，待用。

3.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤6）中，还原性上样缓冲液5X loading的配方为：2.5 mL 0.5mol/L Tris ▪HCl, 0.39g二硫苏糖醇，

0.5g SDS，0.025g溴酚蓝，2.5 mL甘油。

4.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤7）中，所述免染胶的制备方法具体方法如下：采用TGX快速免染制胶试剂盒，根据蛋白分子量选取8‑

12%的凝胶浓度，先将分离胶的A、B液等体积混合，加入8‑12%过硫酸铵和四甲基乙二胺，混合均匀后倒入制胶架内，用异丙醇将液面压平，于35‑39℃干燥15‑20 min；而后将浓缩胶的A、B液等体积混合，加入8‑12%过硫酸铵和四甲基乙二胺，混合均匀后倒入制胶架内，插入梳子，于35‑39℃下干燥10‑15 min。

5.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤2）中，固定化木瓜蛋白酶活化的方法具体为：将0.2‑0.3mL木瓜蛋白酶溶液加入0.7‑0.9 mL分离柱中，将分离柱放入离心管内，8000‑12000 rmp离心0.5‑1.5 min，弃去离心出来的蛋白储存液，加入0.4‑0.6 mL 18‑22mM半胱氨酸消化液，重复离心，弃去离心出来的液体，用橡胶管密封分离柱底部，待用。

6.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤2）中，抗体的前处理的方法具体如下：将Buffer交换柱放入离心管内，2000‑4000rpm 离心1‑3 min，弃去离心出来的存储液，加入 0.8‑1.2mL 18‑22 mM半胱氨酸消化液，2000‑4000rpm离心1‑

3min，弃去离心出来的液体，重复离心2‑4次；吸取 0.4‑0.6m L抗体加入到柱子中，并将柱子放入新的离心管中，2000‑4000rpm离心1‑3min，收集离心出来含半胱氨酸的抗体溶液，待用。

7.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤2）中，酶解制备Fab片段抗体的具体条件如下：酶和抗体的质量比为 0.0080‑0.0090 mg酶/mg IgG，采用20 mM Cys浓度的消化液，酶解时间7.5‑8.5h；孵育完成后，将分离柱放入离心管中，

8000‑12000 rpm 离心1‑3 min，收集离心出来的酶解液，再加入0.25 mL PBS 到柱子中，放入离心管中，8000‑12000rpm离心1‑3min，重复清洗两次，将离心出来的液体计入到酶解液中，共得到1 mL的酶解液。

8.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤2）中，Fab片段抗体的分离纯化方法具体如下：用Protein A Plus柱除去抗体Fc片段，收集含有Fab片段的流出物；然后将流出物在20mM Tris、25mM NaCl中透析后，在HiTrap Q FF柱上通过阴离子交换色谱进一步纯化，用20mM Tris、1000mM NaCl梯度洗脱，通过在PBS中的Superdex 

200柱上的尺寸排阻色谱法进一步纯化Fab片段抗体。

9.如权利要求1所述的古代丝织品的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤3）中，Fab片段抗体硫醇化的方法具体如下：按体积比1:8‑12将10μM HS−(CH2)10−N‑羟基琥珀酰亚胺基‑

11‑巯基十一酸酯的四氢呋喃溶液与抗体 Fab片段溶液混合，在室温下搅拌40‑50min。