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专利号: 2018115817511
申请人: 内江师范学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种宽体沙鳅精液冷冻保存液,其特征在于,包括稀释剂和抗冻剂,所述稀释剂包括以下组分:NaCl20~36g/L、KCl0.3~0.42g/L、海藻糖10~30g/L、蔗糖10~36g/L、牛磺酸10~30mM和辅酶A0.01~0.25mM;

所述抗冻剂包括以下组分:二甲基亚砜、甘油和甲醇。

2.如权利要求1所述的宽体沙鳅精液冷冻保存液,其特征在于,所述稀释剂包括以下组分:NaCl30~36g/L、KCl0.36~0.4g/L、海藻糖20~26g/L、蔗糖32~36g/L、牛磺酸18~22mM和辅酶A0.12~0.17mM。

3.如权利要求1或2所述的宽体沙鳅精液冷冻保存液,其特征在于,所述稀释剂包括以下组分:NaCl34g/L、KCl0.38g/L、海藻糖24g/L、蔗糖32g/L、牛磺酸22mM和辅酶A0.16mM。

4.如权利要求3所述的宽体沙鳅精液冷冻保存液,其特征在于,所述二甲基亚砜、甘油和甲醇在稀释剂中的终浓度分别为8~11%、1~4%和2~4%。

5.采用权利要求1~4所述的冷冻保存液对宽体沙鳅精液进行超低温保存的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取性成熟雄鱼,吸干其生殖孔表面及周围的水分,然后由前往后压鱼腹两侧,收集精液,冰浴备用;

(2)取NaCl、KCl、海藻糖、蔗糖、牛磺酸和辅酶A混合均匀、备用;

(3)将步骤(1)收集的精液与步骤(2)制得的稀释剂以1:3~7的体积比稀释并混合均匀,备用;

(4)先向步骤(3)制得的精液中添加甲醇至终浓度为2~4%,然后在4~6℃条件下保温

6~8分钟,再向精液中添加甘油至终浓度为1~4%,然后在4~6℃条件下保温6~8分钟,最后向精液中添加二甲基亚砜至终浓度为8~11%,得混合精液;

(5)将步骤(4)中制得的混合精液依次在2~6℃条件下孵育20~40分钟,-2~4℃条件下孵育5~20分钟,-30~-10℃条件下孵育10~20分钟,-50~-40℃条件下孵育10~20分钟,然后在-95~-80℃条件中保存。

6.如权利要求5所述的宽体沙鳅精液超低温保存的方法,其特征在于,骤(1)中收集的精液活率在85%以上。

7.如权利要求5所述的宽体沙鳅精液超低温保存的方法,其特征在于,步骤(3)中精液与稀释剂的体积比为1:3。

8.如权利要求5所述的宽体沙鳅精液超低温保存的方法,其特征在于,步骤(4)中先向精液中添加甲醇至终浓度为2%,然后在4℃条件下保温8分钟,再向精液中添加甘油至终浓度为1%,然后在4℃条件下保温6分钟,最后向精液中添加二甲基亚砜至终浓度为10%,备用。

9.如权利要求5所述的宽体沙鳅精液超低温保存的方法,其特征在于,步骤(4)中甲醇、甘油和二甲基亚砜在稀释剂中的终浓度分别为2%、1%和10%。

10.如权利要求5所述的宽体沙鳅精液超低温保存的方法,其特征在于,步骤(5)中的冷存管依次在4℃条件下中孵育30分钟,0℃孵育10分钟,-20℃孵育15分钟,-43℃孵育15分钟,然后在-87℃条件中保存。

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