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专利号: 2018115856747
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种草铵膦脱氢酶突变体,其特征在于,所述草铵膦脱氢酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸的第90位、第91位和第376位进行单突变或多突变获得;

其中,第90位的赖氨酸突变为丝氨酸;第91位甘氨酸突变为丝氨酸或脯氨酸;第376位的丝氨酸突变为精氨酸。

2.如权利要求1所述的草铵膦脱氢酶突变体,其特征在于,所述草铵膦脱氢酶突变体为下列之一:(1)将SEQ ID No.2所示氨基酸第90位的赖氨酸突变为丝氨酸;

(2)将SEQ ID No.2所示氨基酸第91位甘氨酸突变为脯氨酸;

(3)将SEQ ID No.2所示氨基酸第376位的丝氨酸突变为精氨酸;

(4)将SEQ ID No.2所示氨基酸第90位的赖氨酸突变为丝氨酸,同时第91位甘氨酸突变为丝氨酸或脯氨酸;

(5)将SEQ ID No.2所示氨基酸第90位的赖氨酸突变为丝氨酸,第91位的甘氨酸突变为丝氨酸或脯氨酸,同时第376位的丝氨酸突变为精氨酸。

3.如权利要求1所述的草铵膦脱氢酶突变体,其特征在于,将SEQ ID No.2所示氨基酸第90位的赖氨酸突变为丝氨酸,第91位的甘氨酸突变为脯氨酸或丝氨酸,同时第376位的丝氨酸突变为精氨酸。

4.一种如权利要求1~3任一项所述草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。

5.一种包含权利要求4所述编码基因的基因工程菌。

6.如权利要求5所述的基因工程菌,其特征在于,还包括葡萄糖脱氢酶基因。

7.如权利要求5所述的基因工程菌,其特征在于,所述葡萄糖脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

8.如权利要求1~3任一项所述的草铵膦脱氢酶突变体在不对称还原2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸制备L-草铵膦中的应用。

9.如权利要求5~7任一项所述的基因工程菌在不对称还原2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸制备L-草铵膦中的应用。

10.一种不对称还原2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸制备L-草铵膦的方法,包括:以

2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸为底物,葡萄糖为辅助底物,在催化剂的作用下,进行反应,得到L-草铵膦;

其特征在于,

所述催化剂为同时包含草铵膦脱氢酶突变体基因和葡萄糖脱氢酶基因的共表达基因工程菌、共表达基因工程菌的粗酶液或固定化的共表达工程菌;

或者,所述催化剂由催化剂I和催化剂II组成;

催化剂I为草铵膦脱氢酶突变体、权利要求5~7任一项所述的基因工程菌,或者工程菌的粗酶液、固定化的所述基因工程菌;

催化剂II为葡萄糖脱氢酶、包含葡萄糖脱氢酶基因的基因工程菌、工程菌的粗酶液或固定化的包含葡萄糖脱氢酶基因的基因工程菌;

所述草铵膦脱氢酶突变体如权利要求1或2任一项所述;编码所述葡萄糖脱氢酶的基因的核苷酸序列为SEQ ID No.3所示。