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专利号: 2018116189420
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种D-氨基酸氧化酶突变体,其特征在于,所述D-氨基酸氧化酶突变体为下列之一:(1)将SEQ ID No.1所示氨基酸第213位的蛋氨酸突变为丝氨酸,第54位的天门冬酰胺突变为缬氨酸,第58位的苯丙氨酸突变为谷氨酰胺;

(2)将SEQ ID No.1所示氨基酸第213位的蛋氨酸突变为丝氨酸,第54位的天门冬酰胺突变为缬氨酸,第58位的苯丙氨酸突变为谷氨酰胺,第52位的甘氨酸突变为亮氨酸;

(3)将SEQ ID No.1所示氨基酸第213位的蛋氨酸突变为丝氨酸,第54位的天门冬酰胺突变为缬氨酸,第58位的苯丙氨酸突变为谷氨酰胺,第52位的甘氨酸突变为亮氨酸,第335位的丝氨酸突变为苏氨酸或甘氨酸。

(4)将SEQ ID No.1所示氨基酸第213位的蛋氨酸突变为丝氨酸,第54位的天门冬酰胺突变为缬氨酸,第58位的苯丙氨酸突变为谷氨酰胺,第335位的丝氨酸突变为甘氨酸。

2.如权利要求1所述的D-氨基酸氧化酶突变体,其特征在于,所述D-氨基酸氧化酶突变体为将SEQ ID No.1所示氨基酸第213位的蛋氨酸突变为丝氨酸,第54位的天门冬酰胺突变为缬氨酸,第58位的苯丙氨酸突变为谷氨酰胺,第52位的甘氨酸突变为亮氨酸,第335位的丝氨酸突变为甘氨酸。

3.一种如权利要求1或2任一项所述D-氨基酸氧化酶突变体的编码基因。

4.一种包含权利要求3所述编码基因的基因工程菌。

5.如权利要求1或2任一项所述的D-氨基酸氧化酶突变体在催化D,L-草铵膦或D-草铵膦合成4-(羟基甲基磷酰基)-2-羰基-丁酸中的应用。

6.一种制备4-(羟基甲基磷酰基)-2-羰基-丁酸的方法,包括:

以D,L-草铵膦或D-草铵膦为底物,FAD为辅酶,向缓冲溶液中加入过氧化氢酶后,在催化剂的作用下,进行反应,反应液分离纯化后,得到4-(羟基甲基磷酰基)-2-羰基-丁酸;

所述催化剂为D-氨基酸氧化酶突变体或包含D-氨基酸氧化酶突变体基因的基因工程菌或其粗酶液。

7.如权利要求6所述的制备4-(羟基甲基磷酰基)-2-羰基-丁酸的方法,其特征在于,反应体系中,D-氨基酸氧化酶的添加量为0.1~100U/L,过氧化氢酶的添加量为0.1~10U/L,底物的初始浓度为10~500mM。

8.如权利要求6所述的制备4-(羟基甲基磷酰基)-2-羰基-丁酸的方法,其特征在于,反应的温度为30~50℃,时间为6~72小时。

9.如权利要求6所述的制备4-(羟基甲基磷酰基)-2-羰基-丁酸的方法,其特征在于,反应体系的pH值为6~9。