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专利号: 2018116532406
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种源自树蕨黄单胞菌(Xanthomonas arboricola)的葡萄糖基转移酶在生产乙基香兰素-α-D-葡萄糖苷中的应用,其特征在于所述的应用以含葡萄糖基转移酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的发酵液为菌剂,以麦芽糖和乙基香兰素为底物,在pH值6.0-8.5、

20-40℃条件下进行转化反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得乙基香兰素-α-D-葡萄糖苷;所述葡萄糖基转移酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述麦芽糖质量浓度加入量以发酵液体积计为200-500g/L,所述乙基香兰素质量浓度加入量以发酵液体积计为5-50g/L,所述发酵液中湿菌体含量为5-30g/L。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述菌剂按如下方法制备:将含葡萄糖基转移酶编码基因的工程菌接种到含卡那霉素50μg/L发酵培养基中,30-37℃培养4-6h;再加入终浓度为5.6-7.0mM的α-乳糖,22-25℃继续发酵12-18h,取发酵液,即得到生产乙基香兰素-α-D-葡萄糖苷的菌剂;所述发酵培养基组成:10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母粉、54mM甘油、

2.8mM葡萄糖、25mM Na2HPO4、25mM KH2PO4、50mM NH4Cl、5mM Na2SO4、2mM MgSO4,溶剂为去离子水,pH7.0。

4.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述工程菌在发酵前先进行种子活化培养,再将种子液以体积浓度1-5%的接种量接种至发酵培养基,所述种子活化培养为:将含葡萄糖基转移酶编码基因的工程菌接种在含有35μg/ml氯霉素和50μg/ml卡那霉素的种子培养基中,37℃培养至对数生长中期,获得种子液;所述种子培养基组成:酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO4·12H2O 8.9g/L、KH2PO4 3.4g/L、NH4Cl 2.67g/L、Na2SO4 0.71g/L、MgSO4·7H2O 

0.49g/L,溶剂为去离子水,pH7.0。

5.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述转化反应是在发酵罐中进行连续补料反应:将发酵液加入发酵罐中,加入质量终浓度0.05%消泡剂,在pH值6~8.5、20-40℃条件下进行催化转化反应;在反应开始30min后,每隔20min补料乙基香兰素;反应完全后,将反应液分离纯化,获得乙基香兰素-α-D-葡萄糖苷。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述乙基香兰素每次加入量为总添加质量的

0.3-0.7%。