1.一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)制备提取物:由花楸果制备粗提液,减压浓缩,冷冻干燥,得花楸果粗提物;
2)初步纯化:利用聚酰胺色谱柱对步骤1)得到的花楸果粗提物,以乙醇为洗脱液进行梯度洗脱,得到不同梯度的洗脱物;
3)分离化合物:利用高速逆流色谱对步骤2)得到的不同梯度的洗脱物进行分离纯化,得到多酚化合物。
2.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤1)制备提取物,具体包括如下步骤:
1.1)将花楸果捣碎,按料液比1kg:5L~1kg:10L,加入质量浓度为60%~90%的乙醇或甲醇水溶液超声提取,提取温度为35~45℃,提取时间为30~60min,适时搅拌,过滤,得滤液;
1.2)将所得滤液,45℃下减压浓缩,冷冻干燥,得花楸果粗提物。
3.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤2)初步纯化,具体包括如下步骤:
2.1)将步骤1)所得花楸果粗提物溶于水中,以上样浓度15~25mg/mL加入到聚酰胺色谱柱中,静止2~3h,先用蒸馏水洗脱,弃去洗脱液,然后依次使用质量浓度为40~50%乙醇和质量浓度为60~70%乙醇以3mL/min的流速进行洗脱,分别收集40~50%乙醇洗脱液和
60~70%乙醇洗脱液;
2.2)分别对40~50%乙醇洗脱液和60~70%乙醇洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥,由
40~50%乙醇洗脱液得A组分样品,由60~70%乙醇洗脱液得B组分样品。
4.根据权利要求3所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤3)分离化合物,具体包括如下步骤:
3.1)将乙酸乙酯、正丁醇和水,按体积比2~4:0.5~2:4~6配成混合溶液,在分液漏斗中充分振摇后静止分层,取上层作为固定相,下层作为流动相;设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃,然后泵入固定相,待固定相充满高速逆流色谱柱后,调节主机转速为800~900r/min,泵入流动相,检测波长为280nm,流动相流速为1.5~3mL/min;取A组分样品,按体积比
1:0.5~2的固定相和流动相,混合均匀,配成浓度为5~20mg/mL的样品溶液,进样,观察色谱峰,待目标峰出现时收集馏分,减压浓缩去除有机溶剂,冷冻干燥得新绿原酸、绿原酸、槲皮素-3-O-(6″-α-L-鼠李糖基-4”'-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷和芦丁;
3.2)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水,按体积比0.5~1:2~4:0.5~1:2~4配成混合溶液,在分液漏斗中充分振摇后静止分层,取上层作为固定相,下层作为流动相;设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃,然后泵入固定相,待固定相充满高速逆流色谱柱后,调节主机转速为800~900r/min,泵入流动相,检测波长为330nm,流动相流速为1.5~3mL/min;取B组分样品溶解于流动相中,配成浓度为5~15mg/mL的样品溶液,进样,观察色谱峰,待目标峰出现时收集馏分,旋转浓缩去除有机溶剂,冷冻干燥得3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸。
5.根据权利要求4所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤3.1)中,按体积比:乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1.5:5,乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1:5或乙酸乙酯:正丁醇:水=3:1:5。
6.根据权利要求4所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤3.2)中,按体积比:正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:3.5,正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3.5:1:3.5或正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:4。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,所述的花楸果来源于百华花楸。