1.一种用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括
1)将1-十八烯、油酸、镱源、钆源、铒源、钠源、NH4F进行共沉淀反应、离心分离得到OA-NaGdF4:Yb,Er(油酸包覆的NaGdF4:Yb,Er上转换纳米粒子);
2)将1-十八烯、油酸、钇源、钠源、NH4F和所述OA-NaGdF4:Yb,Er进行共沉淀反应、离心分离得到OA-NaGdF4:Yb,Er@NaYF4 UCNPs(油酸包覆的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子);
3)将聚琥珀酰亚胺(PSI)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、油胺(OAm)进行接触反应,接着向体系中添加甲醇进行沉淀得到PSIOAm,然后将钠源、氯仿、所述PSIOAm和OA-NaGdF4:Yb,Er@NaYF4 UCNPs进行超声处理,最后得到-COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子,即用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其中,在步骤1)中,相对于6mL1-十八烯,所述油酸的用量为油酸3-5mL,所述镱源的用量为0.07-0.09g,所述钆源的用量为0.06-0.08g,所述铒源的用量为0.5-1.5mg,所述钠源的用量为0.03-0.05g,所述氟化铵的用量为0.03-
0.06g;
优选地,步骤1)的添料顺序为:先将1-十八烯、油酸、镱源、钆源、铒源进行热处理,然后添加钠源、氟化铵进行共沉淀反应;
更优选地,在步骤1)中,所述热处理满足以下条件:温度为140-170℃,时间为30-
50min;
进一步优选地,在步骤1)中,所述共沉淀反应满足以下条件:先将体系置于40-60℃下保温25-35min,接着将体系温度升至90-110℃且在真空条件下保温8-12min,最后将温度升至260-300℃并保温1-2h。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其中,在步骤2)中,相对于100mg OA-NaGdF4:Yb,Er,所述1-十八烯的用量为6-8mL,所述油酸的用量为油酸2-4mL,所述钇源的用量为0.09-
0.12g,所述钠源的用量为0.03-0.05g,所述NH4F的用量为0.03-0.06g;
优选地,在步骤2)中,物料的添加顺序为:先将1-十八烯、油酸、钇源进行热处理,然后添加钠源、氟化铵和OA-NaGdF4:Yb,Er进行共沉淀反应;
更优选地,在步骤2)中,所述热处理满足以下条件:温度为140-170℃,时间为30-
50min;
进一步优选地,在步骤2)中,所述共沉淀反应满足以下条件:先将体系置于40-60℃下保温25-35min,接着将体系温度升至90-110℃且在真空条件下保温8-12min,最后将温度升至260-300℃并保温1-2h。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其中,在步骤3)中,相对于1.6g聚琥珀酰亚胺(PSI),所述N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的用量为28-36mL、所述油胺(OAm)的用量为1-2mL、所述甲醇的用量为60-100mL;
优选地,在步骤3)中,相对于5mg OA-NaGdF4:Yb,Er@NaYF4 UCNPs,所述氯仿的用量为
0.5-1.5mL、所述钠源的用量为0.001-0.003g、所述PSIOAm的用量为33-45mg;
更优选地,在步骤3)中,所述超声处理满足:时间为5-10min,超声发生器的功率为300-
400W。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述铒源选自醋酸铒、五水合硝酸铒、氧化铒和六水合氯化铒中的至少一者,所述镱源选自四水合醋酸镱、六水合氯化镱、五水硝酸镱和氧化镱中的至少一者,所述钆源选自醋酸钆、六水合硝酸钆、六水合氯化钆、硫酸钆和氧化钆中的至少一者;钇源选自醋酸钇、六水合硝酸钇、六水合氯化钇、氧化钇中的至少一者,所述钠源选自氢氧化钠、醋酸钠、碳酸钠中的至少一者。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其中,在步骤1)-2)中,所述钠源和/或NH4F是通过溶液的形式提供的,所述溶液中的溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇中的至少一者,在步骤3)中,所述钠源通过水溶液的形式提供。
7.一种用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子,其特征在于,所述用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子通过权利要1-6中任意一项所述的制备方法制备而得。
8.一种辣根过氧化物酶的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括:
1)将如权利要求7所述-COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液中形成混合溶液;
2)将检测底物、对苯二胺、H2O2加到所述混合溶液中进行孵育,接着检测荧光强度,然后根据所述工作曲线或者工作曲线方程计算出所述检测底物的浓度;
其中,所述检测底物中含有辣根过氧化物酶。
9.根据权利要求8所述的检测方法,其中,相对于0.017mg H2O2,所述对苯二胺的用量为
0.04-0.06mg,所述-COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子的用量为0.01-
0.03mg,所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液的用量为0.1-0.4mL且pH为4.6-5.6;
优选地,所述孵育满足以下条件:孵育温度为35-40℃,孵育时间为40-50min。
10.根据权利要求8或9所述的检测方法,其中,所述工作曲线方程为I0-I=14.58+
1.94C;其中,I0未加检测底物时的体系的荧光强度,I为添加检测底物时体系的荧光强度,C为检测底物的浓度。