1.一种辣根过氧化物酶的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括:
1)将‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子加入磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲溶液中形成混合溶液;
2)将检测底物、对苯二胺、H2O2加到所述混合溶液中进行孵育,接着检测荧光强度,然后根据工作曲线或者工作曲线方程计算出所述检测底物的浓度;
其中,所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法为:a、将1‑十八烯、油酸、镱源、钆源、铒源、钠源、NH4F进行共沉淀反应、离心分离得到OA‑NaGdF4:Yb,Er,即油酸包覆的NaGdF4:Yb,Er上转换纳米粒子;
b、将1‑十八烯、油酸、钇源、钠源、NH4F和所述OA‑NaGdF4:Yb,Er进行共沉淀反应、离心分离得到OA‑NaGdF4:Yb,Er@NaYF4 UCNPs,即油酸包覆的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子;
c、将聚琥珀酰亚胺PSI、N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)、油胺(OAm)进行接触反应,接着向体系中添加甲醇进行沉淀得到PSIOAm,然后将钠源、氯仿、所述PSIOAm和OA‑NaGdF4:Yb,Er@NaYF4 UCNPs进行超声处理,最后得到‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子,即用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子;
其中,在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤a中,相对于6 mL 1‑十八烯,所述油酸的用量为油酸3‑5mL,所述镱源的用量为0.07‑0.09g,所述钆源的用量为0.06‑0.08g,所述铒源的用量为0.5‑1.5mg,所述钠源的用量为0.03‑0.05g,所述氟化铵的用量为0.03‑0.06g;所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤a的添料顺序为:先将1‑十八烯、油酸、镱源、钆源、铒源进行热处理,然后添加钠源、氟化铵进行共沉淀反应;在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤a中,所述热处理满足以下条件:温度为140‑170℃,时间为30‑50min;在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤a中,所述共沉淀反应满足以下条件:先将体系置于40‑60℃下保温25‑35min,接着将体系温度升至90‑110℃且在真空条件下保温8‑12min,最后将温度升至260‑300℃并保温1‑2h;
其中,在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤b中,相对于100mg OA‑NaGdF4:Yb,Er,所述1‑十八烯的用量为6‑8mL,所述油酸的用量为油酸2‑
4mL,所述钇源的用量为0.09‑0.12g,所述钠源的用量为0.03‑0.05g,所述NH4F的用量为
0.03‑0.06g;所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤b中,物料的添加顺序为:先将1‑十八烯、油酸、钇源进行热处理,然后添加钠源、氟化铵和OA‑NaGdF4:Yb,Er进行共沉淀反应;所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤b中,所述热处理满足以下条件:温度为140‑170℃,时间为30‑50min;所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤b中,所述共沉淀反应满足以下条件:先将体系置于40‑60℃下保温25‑35min,接着将体系温度升至90‑110℃且在真空条件下保温8‑12min,最后将温度升至260‑300℃并保温1‑2h;
其中,在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤c中,相对于1.6g聚琥珀酰亚胺,所述N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)的用量为28‑36mL、所述油胺(OAm)的用量为1‑2mL、所述甲醇的用量为60‑100mL;所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤c中,相对于5mg OA‑NaGdF4:Yb,Er@NaYF4 UCNPs,所述氯仿的用量为
0.5‑1.5mL、所述钠源的用量为0.001‑0.003g、所述PSIOAm的用量为33‑45mg;
所述检测底物中含有辣根过氧化物酶。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其中,相对于0.017mg H2O2,所述对苯二胺的用量为
0.04‑0.06mg,所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子的用量为0.01‑
0.03mg,所述磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲溶液的用量为0.1‑0.4mL且pH为4.6‑5.6。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其中,所述孵育满足以下条件:孵育温度为35‑40℃,孵育时间为40‑50min。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其中,在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤c中,所述超声处理满足:时间为5‑10min,超声发生器的功率为
300‑400W。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其中,所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法中所述铒源选自醋酸铒、五水合硝酸铒、氧化铒和六水合氯化铒中的至少一者,所述镱源选自四水合醋酸镱、六水合氯化镱、五水硝酸镱和氧化镱中的至少一者,所述钆源选自醋酸钆、六水合硝酸钆、六水合氯化钆、硫酸钆和氧化钆中的至少一者;钇源选自醋酸钇、六水合硝酸钇、六水合氯化钇、氧化钇中的至少一者,所述钠源选自氢氧化钠、醋酸钠、碳酸钠中的至少一者。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其中,在所述‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子制备方法的步骤a‑b中,所述钠源和/或NH4F是通过溶液的形式提供的,所述溶液中的溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇中的至少一者,在步骤c中,所述钠源通过水溶液的形式提供。
7.根据权利要求1‑6任意一项所述的检测方法,其中,所述工作曲线方程为I0‑I=14.58+
1.94C;其中,I0未加检测底物时的体系的荧光强度,I为添加检测底物时体系的荧光强度,C为检测底物的浓度。