1.一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:步骤一、材料的采集及处理:
选择生长健壮、无病虫害的野生兴安杜鹃植株,剪取40 50cm长的枝条,进行水培处理,~
待嫩茎长至3 5cm时剪下,用自来水冲洗1 2 h,在无菌操作台内进行消毒处理;
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步骤二、不定芽分化诱导及增殖:
将步骤一消毒处理后的材料接种到不定芽诱导培养基WPM1中培养,培养条件为:温度‑2 ‑1
23 25℃,每日光照12 16h,光照强度30 40μmol·m ·s ;培养15 20d即可诱导出不定芽;
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然后继续放置在培养基WPM1中培养,进行不定芽增殖;
步骤三、不定芽伸长诱导:
将带有不定芽的愈伤组织切成块放入不定芽伸长培养基WPM2中,在温度为23 25℃,每~
‑2 ‑1
日光照12 16h,光照强度30 40μmol·m ·s 的条件下培养15 20d;
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步骤四、丛生芽生根培养:
将茎长1‑2cm的成簇丛生芽接种于生根培养基WPM3中,在温度为23 25℃,每日光照12~ ~
‑2 ‑1
16h,光照强度30 40μmol·m ·s 的条件下培养20 25d生根;
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步骤五、炼苗和移栽:
将根长超过2cm的丛生植株经炼苗2 3 d后移栽到温室培养,其中移栽所用培养基质是~
由泥炭土加入苔藓混合得到的;
步骤一中所述消毒处理的具体方法是:将自来水冲洗过的嫩茎用无菌水清洗1遍,再将茎段放入体积百分浓度为70%的酒精中消毒10sec,取出茎段用无菌水清洗3遍,然后用体积浓度为3%的次氯酸钠消毒40sec,再次用无菌水清洗3遍,最后用无菌滤纸吸干嫩茎表面的水分,用无菌剪刀将嫩茎形态学下端已被消毒液氧化的部分剪掉,即完成;
步骤二中所述不定芽诱导培养基WPM1由400mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、990mg/L K2SO4、170mg/L KH2PO4、96mg/L CaCl2·2H2O、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2EDTA、
8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、22.4mg/L MnSO4·4H2O、6.2mg/L H3BO3、
0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、0.01 1.0mg/L吲哚丁酸、0.01 1.0mg/L噻苯~ ~
隆和蒸馏水制成,pH值为5.5;
步骤三中不定芽伸长培养基WPM2由400mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、990mg/L K2SO4、170mg/L KH2PO4、96mg/L CaCl2·2H2O、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2EDTA、
8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、22.4mg/L MnSO4·4H2O、6.2mg/L H3BO3、
0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、0.01 1.0mg/L吲哚丁酸、0.0001 0. 1mg/L~ ~
噻苯隆和蒸馏水制成,pH值为5.5;
步骤四中的生根培养基WPM3由400mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、990mg/L K2SO4、
170mg/L KH2PO4、96mg/L CaCl2·2H2O、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2EDTA、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、22.4mg/L MnSO4·4H2O、6.2mg/L H3BO3、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、100mg/L肌醇、
2.0mg/L甘氨酸、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、2.0mg/L吲哚丁酸、0.01mg/L噻苯隆和蒸馏水制成,pH值为5.5。
2.根据权利要求1所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤五中炼苗前,向生根后的组培苗瓶内加入无菌水,敞口放置在组培室中炼苗。
3.根据权利要求1所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤五中移栽的具体方法为:将丛生组培苗从瓶中取出,用自来水清洗附着在根表面的培养基,然后移植到填满基质的育苗盆中,每盆一株苗,移植覆土深度刚好盖住根系,压紧基质,移植完成后浇透水,在移栽初期扣瓶保湿2 3天,并使空气相对湿度控制在80%以上,基质相~
对湿度控制在60% 80%,移栽一周后逐渐降低相对湿度,培养温度控制在25 28℃。
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