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专利号: 2019100273054
申请人: 东北林业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:步骤一、材料的采集及处理:

选择生长健壮、无病虫害的野生兴安杜鹃植株,剪取40 50cm长的枝条,进行水培处理,~

待嫩茎长至3 5cm时剪下,用自来水冲洗1 2 h,在无菌操作台内进行消毒处理;

~ ~

步骤二、不定芽分化诱导及增殖:

将步骤一消毒处理后的材料接种到不定芽诱导培养基WPM1中培养,培养条件为:温度‑2 ‑1

23 25℃,每日光照12 16h,光照强度30 40μmol·m ·s ;培养15 20d即可诱导出不定芽;

~ ~ ~ ~

然后继续放置在培养基WPM1中培养,进行不定芽增殖;

步骤三、不定芽伸长诱导:

将带有不定芽的愈伤组织切成块放入不定芽伸长培养基WPM2中,在温度为23 25℃,每~

‑2 ‑1

日光照12 16h,光照强度30 40μmol·m ·s 的条件下培养15 20d;

~ ~ ~

步骤四、丛生芽生根培养:

将茎长1‑2cm的成簇丛生芽接种于生根培养基WPM3中,在温度为23 25℃,每日光照12~ ~

‑2 ‑1

16h,光照强度30 40μmol·m ·s 的条件下培养20 25d生根;

~ ~

步骤五、炼苗和移栽:

将根长超过2cm的丛生植株经炼苗2 3 d后移栽到温室培养,其中移栽所用培养基质是~

由泥炭土加入苔藓混合得到的;

步骤一中所述消毒处理的具体方法是:将自来水冲洗过的嫩茎用无菌水清洗1遍,再将茎段放入体积百分浓度为70%的酒精中消毒10sec,取出茎段用无菌水清洗3遍,然后用体积浓度为3%的次氯酸钠消毒40sec,再次用无菌水清洗3遍,最后用无菌滤纸吸干嫩茎表面的水分,用无菌剪刀将嫩茎形态学下端已被消毒液氧化的部分剪掉,即完成;

步骤二中所述不定芽诱导培养基WPM1由400mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、990mg/L K2SO4、170mg/L KH2PO4、96mg/L CaCl2·2H2O、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2EDTA、

8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、22.4mg/L MnSO4·4H2O、6.2mg/L H3BO3、

0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、0.01 1.0mg/L吲哚丁酸、0.01 1.0mg/L噻苯~ ~

隆和蒸馏水制成,pH值为5.5;

步骤三中不定芽伸长培养基WPM2由400mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、990mg/L K2SO4、170mg/L KH2PO4、96mg/L CaCl2·2H2O、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2EDTA、

8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、22.4mg/L MnSO4·4H2O、6.2mg/L H3BO3、

0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、0.01 1.0mg/L吲哚丁酸、0.0001 0. 1mg/L~ ~

噻苯隆和蒸馏水制成,pH值为5.5;

步骤四中的生根培养基WPM3由400mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、990mg/L K2SO4、

170mg/L KH2PO4、96mg/L CaCl2·2H2O、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2EDTA、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、22.4mg/L MnSO4·4H2O、6.2mg/L H3BO3、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、100mg/L肌醇、

2.0mg/L甘氨酸、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、2.0mg/L吲哚丁酸、0.01mg/L噻苯隆和蒸馏水制成,pH值为5.5。

2.根据权利要求1所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤五中炼苗前,向生根后的组培苗瓶内加入无菌水,敞口放置在组培室中炼苗。

3.根据权利要求1所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤五中移栽的具体方法为:将丛生组培苗从瓶中取出,用自来水清洗附着在根表面的培养基,然后移植到填满基质的育苗盆中,每盆一株苗,移植覆土深度刚好盖住根系,压紧基质,移植完成后浇透水,在移栽初期扣瓶保湿2 3天,并使空气相对湿度控制在80%以上,基质相~

对湿度控制在60% 80%,移栽一周后逐渐降低相对湿度,培养温度控制在25 28℃。

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