1.一种小鼠截短IL‑36α蛋白的生产方法,其特征在于,包括以下步骤 :
1)构建pUC57‑mIL‑36α质粒:合成小鼠截短IL‑36α蛋白基因,克隆入pUC57载体质粒,构建pUC57‑mIL‑36α质粒;所述小鼠截短IL‑36α蛋白基因的DNA如SEQ ID NO.1所示;
2)PCR扩增:以P1和P2为特异性引物,在引物的两侧导入NcoⅠ和XhoⅠ酶切位点,以pUC57‑mIL‑36α质粒为模板,进行PCR扩增;所述的特异性引物P1和P2的序列为:P1:5’‑GGGCCATGGGCAGAGCAGCAAGCCC‑3’
P2:5’‑CCCCTCGAGATGCACCACGATCATTTC‑3’
PCR反应体系为:2×PfuMasterMix25μL,P1、P2引物各2μL,pUC57‑mIL‑36α质粒模板0.2μL,加双蒸水补充至50μL;PCR反应条件为:94℃预变性2min;94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸35 s,扩增30个循环;72℃延伸10 min
3)pET28a‑mIL‑36α重组表达载体的构建:将PCR扩增产物和pET28a载体质粒分别用NcoⅠ、XhoⅠ进行双酶切,双酶切后凝胶回收IL‑36α与pET28a载体,回收后的IL‑36α与pET28a载体经T4连接酶定向连接,构建重组表达载体pET28a‑mIL‑36α;
4)转化:将重组表达载体pET28a‑mIL‑36α 转化大肠杆菌BL21,获得IL‑36α重组工程菌;
5)小鼠截短IL‑36α蛋白的诱导表达:将IL‑36α重组工程菌接种于含卡那霉素的LB培养基中,37℃、200r/min 震荡培养过夜;次日,以1:100比例扩大培养,37℃、210r/min 震荡培养3h,至OD600达到0.6时,加入终浓度为0.7mmol/L的IPTG,20℃,120 r/min进行诱导表达
20h,获得菌体;
6)小鼠截短IL‑36α蛋白的纯化:采用超声破碎法将获得的菌体裂解,离心取上清液,将上清液注入Ni‑NAT柱中,先用50mM咪唑洗脱,弃洗脱液,再用200mM咪唑洗脱,收集洗脱液,得纯化的小鼠截短IL‑36α蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种小鼠截短IL‑36α蛋白的生产方法,其特征在于,所述的小鼠截短IL‑36α蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。