1.一种可识别蛋白质的分子印迹水凝胶修饰电极的制备方法,其特征是包括以下步骤:
a)将用无水乙醇清洗后的丝网印刷技术制备的裸碳电极浸泡到质量百分比为0.01%-
2%的3-氨基丙基三乙氧基硅烷水溶液中2-24小时,在裸碳电极表面引入氨基;
b)配制蛋白质质量百分比浓度为0.01%-5%,海藻酸钠质量百分比浓度为0.1%-5%,增强剂质量百分比浓度为0.1%-10%的混合物水溶液,静置消泡放置于无菌容器中备用;
c)配制氯化钙质量百分比浓度为0.1%-10%的氯化钙水溶液;
d)将步骤b)得到的混合物水溶液,均匀地涂覆在步骤a)得到的表面引入氨基的裸碳电极上,利用氨基与海藻酸钠上的羧基之间的相互作用使海藻酸钠分子结合在裸碳电极表面;通过调节海藻酸钠的质量百分比浓度调节溶液粘度,从而控制混合物水溶液的涂覆厚度为10-200微米;立即将涂覆步骤b)得到的混合物水溶液的裸碳电极浸泡到步骤c)得到的氯化钙水溶液1-24小时,得到含蛋白质的水凝胶修饰电极;由于丝网印刷技术制备的裸碳电极可以做成各种形态和大小,步骤b)得到的混合物水溶液能结合到不同各种形态和大小的电极上,且厚度可控,可以用0.01-100毫升的混合物水溶液制备大小不同的水凝胶修饰电极,对于特别昂贵的蛋白质具有价格优势;
e)将步骤d)得到的含蛋白质的水凝胶修饰电极用洗脱液洗脱掉蛋白质,得到可识别蛋白质的分子印迹水凝胶修饰电极;以分子印迹水凝胶修饰电极作为工作电极,银电极作为参比电极,铂片作为辅助电极,采用循环伏安法测试蛋白质的吸附及选择性识别性能;由于分子印迹水凝胶修饰电极上的分子印迹水凝胶可做到很薄,因此蛋白质洗脱和吸附较快,检测时间短,灵敏度高;
f)由于在制备过程中没有引入有毒有害试剂,没有聚合反应热引起蛋白质构象的变化,洗脱蛋白质的过程也比较温和,因此步骤e)得到的可识别蛋白质的分子印迹水凝胶修饰电极生物相容性好,识别性能高,在蛋白质分析检测领域具有良好的应用前景。
2.如权利要求1所述一种可识别蛋白质的分子印迹水凝胶修饰电极的制备方法,其特征是所述的蛋白质为牛血清蛋白、卵清蛋白、粘连蛋白、转化生长因子、溶菌酶中的任意一种或两种以上混合物。
3.如权利要求1所述一种可识别蛋白质的分子印迹水凝胶修饰电极的制备方法,其特征是所述的增强剂为氧化石墨烯、羧化多壁碳纳米管、羧甲基壳聚糖、羧化二氧化钛中的任意一种或两种以上混合物;增强剂的作用一方面可以提高海藻酸钙水凝胶的强度,另一方面也改善了其导电性能。
4.如权利要求1所述一种可识别蛋白质的分子印迹水凝胶修饰电极的制备方法,其特征是所述的洗脱液为磷酸盐缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、醋酸缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的任意一种。