1.一种泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,将泽泻和白术先制成泽泻汤提取液,再制成泽泻汤标准煎液,对泽泻汤标准煎液分别进行质量检测,所述质量检测分别包括出膏率、含量、HPLC指纹图谱、物理指纹图谱和UV‑Vis指纹图谱的检测;
所述HPLC指纹图谱的检测包括以下步骤:A、称定泽泻汤标准煎液的干膏粉末1 g于100 ml锥形瓶中,精密移10 ml甲醇作为溶媒,称重,超声40 min,冷却至室温后,称重,补足溶媒,混匀后过0.45 μm有机滤膜得到滤液;
B、对滤液进行液相色谱检测得到HPLC指纹图谱;
其中色谱条件为:选用C18色谱柱,其参数为:内径4. 6 mm、柱长250 mm、填料平均粒径
5 μm;柱温:35 ℃;进样量10 μl;流动相:乙腈‑水;流速:1 ml/min;
流动相条件为:1)流动相时间为0 30min、流动相乙腈:水的体积比为10:90‑45:55、检~
测波长为:240nm;2)流动相时间为30 85min、流动相乙腈:水的体积比为45:55‑90:10;其中~
流动相时间30 50min时检测波长为:240nm,流动相时间50 50.01min时检测波长由 240nm~ ~
转换至210nm,流动相时间50.01 85min 时检测波长为210nm;3)流动相时间为85‑90min、流~
动相乙腈:水的体积比为90:10‑10:90、检测波长为:210nm;4)流动相时间为90‑100min、流动相乙腈:水的体积比为10:90检测波长为:210nm;
C、由至少10批泽泻汤标准煎液HPLC指纹图谱与泽泻汤标准煎液HPLC对照指纹图谱进行对比,并进一步得到HPLC指纹图谱的相似度范围,将步骤B得到的滤液的HPLC指纹图谱与对照指纹图谱的相似度进行分析。
2.根据权利要求1所述的泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,所述出膏率的检测为:先取泽泻汤提取液水浴蒸发溶媒得到膏体,膏体在100‑110 ℃下干燥2‑4小时得到干膏,称重,最后根据泽泻汤提取液体积和生药量的换算,得到出膏率。
3.根据权利要求1所述的泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,所述含量检测包括以下步骤:
A、称取泽泻汤标准煎液的干膏粉末溶于溶媒中,干膏粉末与溶媒的质量比为(1:5)‑(1:50),混匀后过滤得滤液;
B、对滤液进行液相色谱检测:其中包括滤液中的白术内酯Ⅲ的液相色谱检测和23‑乙酰泽泻醇B的液相色谱检测;
C、运用外标一点法得到白术内酯Ⅲ、23‑乙酰泽泻醇B的含量数据。
4.根据权利要求3所述的泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,所述含量检测包括以下步骤:
A、称定泽泻汤标准煎液的干膏粉末1 g于100 ml锥形瓶中,精密移取10 ml甲醇作为溶媒,称重,超声40 min,冷却至室温后,称重,补足溶媒,混匀后过0.45 μm有机滤膜,得到滤液;
B、对滤液进行液相色谱检测:其中包括滤液中的白术内酯Ⅲ含量的液相色谱检测和
23‑乙酰泽泻醇B含量的液相色谱检测;
其中,白术内酯Ⅲ含量检测的色谱条件为:选用C18色谱柱,其参数为:内径4. 6 mm、柱长250 mm、填料平均粒径5 μm ;柱温:35 ℃;检测波长:220 nm;进样量10 μl;流动相:
62%乙腈 ‑38%水溶液;流速:1 ml/min;
23‑乙酰泽泻醇B含量检测的色谱条件为:选用C18色谱柱,其参数为:内径4. 6 mm、柱长250 mm、填料平均粒径5 μm;柱温:35 ℃;检测波 长:208 nm;进样量10 μl;流动相:73%乙腈‑27%水溶液;流速:1 ml/min;
C、运用外标一点法得到白术内酯Ⅲ、23‑乙酰泽泻醇B的含量数据。
5.根据权利要求1所述的泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,所述物理指纹图谱检测为:
A、构建松密度(Da)、振实密度(Dc)、相对均齐指数(Iθ)、豪斯纳比(IH) 、休止角(α) 、颗粒间孔隙率(Ie)、卡尔指数(IC) 、干燥失重(% HR) 、吸湿性(%H)组成的物理指纹图谱;
B、对泽泻汤标准煎液制成的干膏进行各物理指纹图谱指标检测;
C、运用相关系数法计算干膏的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度进行分析;
其中,松密度(Da)检测为:取洁净、干燥的 50 mL量筒,将20 g待测干膏粉末缓慢地加入到量筒中,轻轻抹平干膏粉末表面,读取待测干膏粉末的体积(Va);
振实密度(Dc)检测为:将上述盛有待测干膏粉末的量筒,同一高度上下振动200次,读取振动后的待测干膏粉末的体积(Vc);
相对均齐度指数(Iθ)检测为:将待测干膏粉末依次过药典筛三、四、五、六、七、 八、九号筛,振荡5min,分别记录每个筛网上截留的粉末质量;取平均孔径分别为 0.3025、0.215、
0.165、0.1375、0.1075、0.0825 mm 的筛网截留的粉末,计算相对均齐度指数,公式为: Iθ=Fm/100+(dm‑dm‑1)Fm‑1+(dm+1 ‑dm )Fm+1+(dm‑dm‑2)Fm‑2+ (dm+2‑dm)Fm+2… (dm+n‑ dm) Fm+n
其中,Fm为中间粒径范围粉末的质量百分比,Fm‑1为中间粒径范围下一层粉末的质量百分比,Fm+1为中间粒径范围上一层粉末的质量百分比,n为所确定的粒径范围个数,dm为中间粒径范围的粉末平均粒径,dm‑1为中间粒径范围下一层的粉末平均粒径,dm+1为中间粒径范围上一层的粉末平均粒径;
豪斯纳比(IH)检测为:由松密度和振实密度计算而得,公式如下:IH =Dc/Da;
休止角(α)检测为:采用固定漏斗法测定,将2个漏斗串联放置漏斗下端顶尖位置距离坐标纸的高度为H,缓慢匀速地将粉末倒入漏斗中,直至粉末所形成圆锥体的顶尖接触到漏斗的顶尖位置时,计算圆锥体底面半径R,公式如下:α=tan ‑1(H/R);
颗粒间空隙率(Ie)检测为:由松密度和振实密度计算而得,公式如下:Ie=(Dc‑Da)/(Da×Dc);
卡尔指数(IC)检测为:由松密度和振实密度计算而得,公式如下:IC=(Dc‑Da)×100/Dc;
干燥失重(%HR):取约3 g待测干膏粉末平铺于样品盘中,于105℃下加热 10 min;检测水分含量;
吸湿性(%H):取干燥的蒸发皿置于下部盛有饱和氯化钠水溶液的恒温干燥器中,12 h后精密称重(m1);取约3 g待测干膏粉末平铺于上述蒸发皿中,精密称重(m2);将蒸发皿置于上述恒温干燥器中,24h后精密称重(m3);计算其吸湿性,公式如下:%H=(m3-m2)/(m2-m1)。
6.根据权利要求1所述的泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,所述UV‑Vis指纹图谱的检测包括以下步骤:
A、称取泽泻汤标准煎液的干膏粉末加水溶解、稀释、定容,超声摇匀后取适量溶液离心,得到澄清液;
B、对澄清液进行UV‑Vis指纹图谱检测,得到澄清液的UV‑Vis指纹图谱;
C、运用相关系数法计算澄清液指纹图谱与对照指纹图谱的相似度进行分析。
7.根据权利要求6所述的泽泻汤标准煎液的质量检测方法,其特征在于,所述UV‑Vis指纹图谱的检测包括以下步骤:
A、称取泽泻汤标准煎液的干膏粉末0.020 g,于100 mL容量瓶中,加水溶解、稀释、定容,超声5 min,摇匀后取适量溶液离心,取得澄清液;
B、对澄清液进行UV‑Vis指纹图谱检测;
光谱扫描条件:以水调整基线并作为参比液进行紫外光谱测定,光谱带宽1.00 nm,扫描范围:200.00至800.00 nm,光度模式:Abs,扫描间隔1.0 nm,扫描速度:快;
C、运用相关系数法计算澄清液的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度进行分析。
8.一种泽泻汤标准煎液的质量评价方法,其特征在于,包括以下步骤:A、将泽泻和白术制成的泽泻汤标准煎液;
B、对泽泻汤标准煎液进行出膏率、含量、HPLC指纹图谱、物理指纹图谱和UV‑Vis指纹图谱检测;
C、根据出膏率、含量、HPLC指纹图谱、物理指纹图谱和UV‑Vis指纹图谱的质量评价标准分别进行评价;
所述HPLC指纹图谱的检测包括以下步骤:A、称定泽泻汤标准煎液的干膏粉末1 g于100 ml锥形瓶中,精密移取10 ml甲醇作为溶媒,称重,超声40 min,冷却至室温后,称重,补足溶媒,混匀后过0.45 μm有机滤膜得到滤液;
B、对滤液进行液相色谱检测得到HPLC指纹图谱;
其中色谱条件为:选用C18色谱柱,其参数为:内径4. 6 mm、柱长250 mm、填料平均粒径
5 μm;柱温:35 ℃;进样量10 μl;流动相:乙腈‑水;流速:1 ml/min;
流动相条件为:1)流动相时间为0 30min、流动相乙腈:水的体积比为10:90‑45:55、检~
测波长为:240nm;2)流动相时间为30 85min、流动相乙腈:水的体积比为45:55‑90:10;其中~
流动相时间30 50min时检测波长为:240nm,流动相时间50 50.01min时检测波长由 240nm~ ~
转换至210nm,流动相时间50.01 85min 时检测波长为210nm;3)流动相时间为85‑90min、流~
动相乙腈:水的体积比为90:10‑10:90、检测波长为:210nm;4)流动相时间为90‑100min、流动相乙腈:水的体积比为10:90检测波长为:210nm;
C、由至少10批泽泻汤标准煎液HPLC指纹图谱与泽泻汤标准煎液HPLC对照指纹图谱进行对比,并进一步得到HPLC指纹图谱的相似度范围,将步骤B得到的滤液的HPLC指纹图谱与对照指纹图谱的相似度进行分析。