1.基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，其特征在于，机理如下：在底物dTTP存在的条件下，TdT催化单链DNA上的3’-OH末端进行延伸聚合作用，得到富T DNA长链，通过该长链形成CuNCs，利用铜的溶出产生电化学信号，实现TdT活性检测，而单链DNA在Exo I的存在下被水解，无法实现TdT延伸聚合作用，无法产生电化学信号。Exo I和TdT的浓度变化会影响电化学传感器的电化学响应。

2.基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，具体步骤如下：

(1)将巯基DNA(2.5～7.5μL，0.25～0.75μM)和三(2-羧乙基)膦(TCEP)(0.5～1.5μL，

0.5～1.5mM)全称，混合均匀，在37℃下放置30～90min，滴于干净的裸金电极(Au)表面，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 1。

(2)取1～3μL 3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液(10mM MOPS，150mM NaCl，pH 7.6)、0.5～

1.5μL 5×TdT缓冲液、dTTP(0.5～1.5μL，5～15mM)和TdT(0.1～1.5μL，5～15U/mL)制备TdT反应液，控制总体积为2.5～7.5μL，混合均匀，滴于Electrode 1表面，在37℃下放置0.5～

1.5h，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 2。

(3)向Electrode2中电极表面滴加Cu2+(2.5～7.5μL，0.5～1.5mM)，室温孵育10～

30min，蒸馏水缓缓冲洗电极。然后向电极表面滴加抗坏血酸钠溶液(2.5～7.5μL，1～3mM)，室温反应10～30min，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 3，于磷酸缓冲溶液(PBS，0.1M，pH 7.0)中检测电化学响应。

在步骤(2)，改变TdT浓度，用于传感器制备，然后如以上步骤(1)-(3)制备一系列传感器，用来检测不同浓度TdT的电化学响应。

为了探索ExoI活性，步骤(1)后，取ExoI溶液(2.5～7.5μL，0.01～50U/mL)滴涂于电极表面，在室温下孵育30～120min，蒸馏水缓缓冲洗电极，再把上述TdT反应液滴加到电极表面，然后如以上步骤(1)-(3)制备一系列传感器，用来检测不同浓度Exo I的电化学响应。

3.如权利要求1和2所述的基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，其特征在于：用来检测TdT的电化学方法为方波伏安法，设置电位范围为0～+0.3V，振幅为25mV。

4.如权利要求1和2所述的基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，其特征在于：本发明传感器，可以实现不同浓度TdT和Exo I的检测，其中，TdT的检测限低至0.0008U/mL，Exo I的检测限低至0.002U/mL。

5.如权利要求1和2所述的基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，其特征在于：本发明传感器，可以实现对TdT抑制剂PP和Exo I抑制剂PEG的检测，半抑制浓度IC50分别为22μM和311μM。