1.一种基于DNA‑铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器,其特征在于,所述电化学生物传感器是根据如下方法构建获得的:(1)将巯基DNA和三(2‑羧乙基)膦TCEP混合均匀,在37℃下放置30~90min,滴于干净的裸金电极Au表面,蒸馏水缓缓冲洗电极,记为Electrode 1;
其中,巯基DNA用量为2.5~7.5μL,浓度为0.25~0.75μM;
三(2‑羧乙基)膦TCEP用量为0.5~1.5μL,浓度为0.5~1.5mM;
(2)取1~3μL 3‑吗啉丙磺酸MOPS缓冲液、0.5~1.5μL 5×TdT缓冲液、dTTP和TdT制备TdT反应液,控制总体积为2.5~7.5μL,混合均匀,滴于Electrode 1表面,在37℃下放置0.5~1.5h,蒸馏水缓缓冲洗电极,记为Electrode 2;
其中,3‑吗啉丙磺酸MOPS缓冲液构成为:10mM MOPS,150mM NaCl,pH 7.6;
dTTP用量为0.5~1.5μL,浓度为5~15mM;
TdT用量为0.1~1.5μL,浓度为5~15U/mL;
2+
(3)向Electrode2中电极表面滴加Cu ,室温孵育10~30min,蒸馏水缓缓冲洗电极,然后向电极表面滴加抗坏血酸钠溶液,室温反应10~30min,蒸馏水缓缓冲洗电极,记为Electrode 3,于磷酸缓冲溶液中检测电化学响应,即得所述电化学生物传感器;
2+
其中,Cu 用量为2.5~7.5μL,浓度为0.5~1.5mM;
抗坏血酸钠溶液用量为2.5~7.5μL,浓度为1~3mM;
磷酸缓冲溶液PBS构成为:浓度0.1M,pH 7.0;
其中,在步骤(2)中,改变TdT浓度,如步骤(1)‑(3)制备一系列传感器,用来检测不同浓度TdT的电化学响应;
或者,在步骤(1)后,取Exo I溶液滴涂于电极表面,在室温下孵育30~120min,蒸馏水缓缓冲洗电极,再把步骤(2)中制备的TdT反应液滴加到电极表面,如步骤(1)‑(3)制备一系列传感器,用来检测不同浓度Exo I的电化学响应;其中,Exo I溶液用量为2.5~7.5μL,浓度为0.01~50U/mL。
2.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,TdT的检测限低至0.0008U/mL。
3.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,Exo I的检测限低至0.002U/mL。