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专利号: 2019101300148
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)B8W22,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 2017751,保藏日期2017年11月30日,地址为中国,武汉,武汉大学,邮编

430072。

2.一种权利要求1所述芽孢杆菌B8W22在拆分外消旋(R,S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用为:以芽孢杆菌B8W22经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体经冷冻干燥后的干菌体为催化剂,以外消旋(R,S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯为底物,以pH值7.0~8.0的磷酸缓冲液为反应介质,在25~40℃、180rpm条件下进行拆分反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得(S)-吲哚啉-2-甲酸。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述底物加入终浓度为1~50g/L缓冲液;催化剂加入量以湿菌体计为5~20g/L缓冲液,以干菌体重量计为1~3g/L缓冲液。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:

(1)斜面培养:将芽孢杆菌B8W22接种至斜面培养基,在30℃培养1天,获得斜面菌体;斜面培养基组成:蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L,NaCl 10g/L,质量浓度2%琼脂,溶剂为去离子水,pH 7.0;

(2)种子培养:取斜面菌体接种于种子培养基,在30℃、150r/min条件下培养24h,获得种子液;种子培养基组成:蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L,NaCl 10g/L,溶剂为去离子水,pH 

7.0;

(3)发酵培养:在无菌条件下,取种子液以体积浓度2%的接种量接种于产酶培养基中,在30℃、150r/min条件下培养24h,获得发酵液,取发酵液在12000rpm离心15min,弃上清液,收集湿菌体;产酶培养基组成为:葡萄糖15g/L,牛肉膏20g/L,NaCl 0.5g/L,MgSO4·7H2O 

0.2g/L,FeSO4·7H2O 0.01g/L,(NH4)2SO4 5g/L,溶剂为去离子水,pH 7.0;

(4)干菌体的制备:取湿菌体在-40℃条件下,冻干2天,得到干菌体。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述分离纯化的方法为:反应结束后,反应液用正己烷萃取,充分振荡,12000rpm离心15min,取下层水相加NaOH至pH 10.0,充分振荡,

12000rpm离心15min,取上清,用盐酸调节至2.0后,减压过滤,获得滤液和滤渣,滤渣为产品(S)-吲哚啉-2-甲酸。