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专利号: 2019101727707
申请人: 宁波远志立方能源科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法,其特征在于,包括:

步骤一、将金电极进行打磨、抛光、洗涤干燥;

步骤二、金电极活化处理:

a、将步骤一中的金电极表面浸泡于浓度为2μM的miRNA-21适配体溶液中1min,然后采用强度为15kGy的电子束照射3min,再浸泡于温度度为4℃,浓度为10μM的葡萄糖水溶液中

4h,再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s,用氮气吹干;

b、用PH为6.8的PBS溶液浸泡步骤a处理后的金电极表面,并在浸泡的同时置于磁场强度为1T的磁场中,5min后取出,用浓度为5μM的硼酸的乙醇溶液冲洗15min,然后再用PH为

6.8的PBS溶液冲洗30s,用氮气吹干;

c、用浓度为1mM的巯基乙醇溶液滴加到步骤b处理的金电极表面,直至金电极表面布满巯基乙醇溶液,置于4℃环境中反应1h,然后用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s,用氮气吹干,得到活化金电极;

步骤三、重复步骤一和步骤二制备多个活化金电极,分别向多个活化金电极表面滴加不同浓度的miRNA-21溶液,置于37℃环境中60min,再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s,用氮气吹干,得到多个检测金电极;

步骤四、以银氯化银电极和铂电极分别为参比电极和对电极,以步骤三中的检测金电极为工作电极,搭建多个三电极体系,采用交流阻抗法扫描得到多个交流阻抗曲线图,根据交流阻抗曲线图拟合得到每个浓度的miRNA-21溶液对应的阻抗值;

步骤五、以浓度不为0的miRNA-21溶液的阻抗值减去浓度为0的miRNA-21溶液的阻抗值的差值为纵坐标,以miRNA-21溶液的浓度为横坐标,计算得到miRNA-21溶液的阻抗值的差值与浓度的线性关系;

步骤六、按照步骤一和步骤二制备活化金电极,向该活化金电极表面滴加10μL含有未知浓度的miRNA-21的待测样液,置于37℃环境中60min,再用PH为6.8的PBS溶液冲洗30s,用氮气吹干,得到检测金电极;

步骤七、以银氯化银电极和铂电极分别为参比电极和对电极,以步骤六中的检测金电极为工作电极,搭建三电极体系,采用交流阻抗法扫描得到一个交流阻抗曲线图,根据交流阻抗曲线图拟合得到待测样液对应的阻抗值,以该阻抗值减去浓度为0的miRNA-21溶液的阻抗值,得到差值,将该差值代入步骤五中的线性关系,计算得到待测样液中miRNA-21的浓度。

2.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法,其特征在于,步骤一具体为:将金电极表面置于NaHCO3浓度为5μM、KCl浓度为10μM的超纯水溶液中,于温度为65℃水浴条件下浸泡40min,用超纯水冲洗后,再置于乙酸浓度为5μM、硅酸浓度为2μM的超纯水溶液中,于温度为80℃水浴条件下浸泡60min,用超纯水冲洗后,在抛光布上用0.05μm的抛光粉打磨,再用超纯水冲洗干净。

3.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法,其特征在于,步骤三-12 -12 -11中的miRNA-21溶液的浓度分别为0mol/L、2×10 mol/L、5×10 mol/L、1×10 mol/L、2×

10-11mol/L,滴加到活化金电极表面的体积为10μL。

4.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法,其特征在于,miRNA-

21的核苷酸序列为:5'-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3';miRNA-21适配体的核苷酸序列为5'-TCAACATCAGTCTGATAAGCTATTT-(CH2)6-SH-3'。

5.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法,其特征在于,步骤a中的葡萄糖水溶液的配置方法为:将超纯水置于-10℃下冷冻30min,加入乙酸,使乙酸浓度为1μM,置于4℃环境中静置10min,再置于-10℃下冷冻10min,加入葡萄糖,置于4℃温度条件下,超声频率为80KHz,超声处理10min。

6.如权利要求1所述的基于电化学交流阻抗检测miRNA-21的方法,其特征在于,步骤四和步骤七中扫描参数设置为:振幅为0.005V,频率为0.1~1000Hz的条件下,在反应介质液为含有[Fe(CN)6]3-和Fe(CN)64-的溶液中进行检测,其中,[Fe(CN)6]3-和Fe(CN)64-的总浓度为5mmol。