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专利号: 2019102104578
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 一般的物理或化学的方法或装置
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、首先采用琼脂糖凝胶作为基质,经高碘酸钠溶液醛基化反应,制备得到醛基化琼脂糖凝胶;

S2、其次采用氨基葡萄糖作为亲和配基,偶联在步骤S1制备得到的醛基化琼脂糖凝胶上;

S3、再采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物,制备得到稳定的亲和层析介质;

S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干,储存在乙醇溶液中备用。

2.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述的琼脂糖凝胶选自琼脂糖6FF凝胶、琼脂糖4FF凝胶、琼脂糖CL-6B凝胶、琼脂糖CL-4B凝胶、琼脂糖6B凝胶、琼脂糖4B凝胶中的任意一种或任意几种的组合。

3.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述琼脂糖凝胶与所述高碘酸钠的质量比10:1-5。

4.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述醛基化琼脂糖凝胶与所述氨基葡萄糖的质量比为10:5-15。

5.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述乙醇溶液的浓度为10-25%。

6.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S1中,醛基化反应的温度为15-40℃,时间为0.5-

3h,转速为100-300rpm。

7.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S2中,偶联反应的温度为25-40℃,时间为8-24h,转速为100-300rpm。

8.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S3中,还原反应的温度为2-6℃,时间为1-5h。

9.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S4中,所述亲和层析介质储存的温度为2-6℃。

10.一种分离纯化己糖激酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、先将含己糖激酶的发酵液离心除去菌体,得到完全澄清的发酵液;

S2、利用权利要求1-9中任意一种方法制备得到的亲和层析介质孵育步骤1)中得到的样品;

S3、洗脱步骤S2中亲和层析介质吸附的己糖激酶。