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专利号: 2019102177066
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-08-24
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酯酶在拆分(R,S)-5-己内酯中的应用,其特征在于所述酯酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述酯酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:以含酯酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体冻干粉为催化剂,以(R,S)-5-己内酯为底物,以pH7.0缓冲液为反应介质,在25-50℃、1000rpm条件下进行拆分反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得(S)-5-己内酯。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂用量以缓冲液体积计为10g/L,所述底物终浓度以缓冲液体积计为10g/L。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于反应时间为1-5h。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应条件为35℃、1000rpm反应5h。

7.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述缓冲液为pH7.0、0.2mM的Na2HPO4/NaH2PO4缓冲溶液。

8.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含酯酶编码基因的工程菌接种在LB培养基中,37℃培养OD600至0.4-0.6,加IPTG至终浓度0.02mM,30℃培养10-12h,菌液8000rpm,4℃离心10min,收集菌体,再用PBS缓冲液洗涤菌体2次,8000rpm,4℃离心10min,收集湿菌体,冻干,得到湿菌体冻干粉。